【文献速递】LICOR Odyssey定量Western Blots协助解析microRNAs对胶质母细胞瘤的调控机制

8月4日，发表于Journal of Experimental & Clinical Cancer Research的最新研究成果“MiR-7 inhibits progression of glioblastoma by impairing autophagy resolution, energy metabolism and ECM remodeling”解析了 miR-7 在胶质母细胞瘤（GBM）中的“多维度抑癌机制”：① 双重调控自噬（通过对 PI3K/AKT/mTORC1 信号通路的调控来诱导自噬起始过程，同时通过对两个关键 SNARE 蛋白（STX17 和 SNAP29）的转录后抑制来阻断自噬后期阶段）；② 破坏线粒体功能与糖酵解，切断能量供应；③ 重塑 ECM，限制肿瘤浸润（图1）。

图1. miR-7 对胶质母细胞瘤（GBM）作用的示意图

LICOR Odyssey贡献

LICOR Odyssey 的高灵敏度、宽动态范围与准确的定量结果，确保了本研究中Western Blot结果的可靠性，为类似 microRNAs 调控机制研究提供了技术参考。

01 自噬调控

miR-7 过表达显著改变自噬相关蛋白表达：使自噬体标志物 LC3B-II 与自噬底物 p62 蛋白水平均显著升高，且雷帕霉素（自噬诱导剂）无法降低 p62 积累，证明自噬受阻（图 2D）；对控制自噬启动的经典信号通路的分析表明，miR-7 导致了自噬抑制剂 mTOR 和 AKT 的下调，同时自噬诱导剂 AMPK 的磷酸化和激活水平增加（图 2E）。

图2. miR-7 过表达显著改变自噬相关蛋白表达

miR-7过表达也可显著降低自噬融合关键 SNARE 蛋白 STX17 与 SNAP29 的表达（图3B），且 rescue 实验显示，过表达无 3'UTR（可抵抗 miR-7 抑制）的 STX17-GFP 或 SNAP29-GFP 后，LC3B-II 与 p62 的异常积累得到缓解，证实 miR-7 通过转录后抑制 STX17 和 SNAP29 阻断自噬后期融合过程（图 3E、F）。

图3. miR-7 在转录后阶段对 SNARE 复合物蛋白 STX17 和 SNAP29 的表达进行调控

此外，miR-7 还下调溶酶体功能相关蛋白，如与对照组细胞相比，转染了 miR-7 的细胞中溶酶体标志物 LAMP1 和 LAMP2的表达显著增加（图4B），关键溶酶体蛋白酶组织蛋白酶 B（CTSB）的前体及成熟形式均减少（图 4F），同时溶酶体生物发生相关蛋白 BLOC1S4、SCARB2 的表达也显著降低（图 4G），提示 miR-7 导致溶酶体功能异常，进一步加重自噬障碍。

图4. miR-7 导致缺陷性溶酶体的积累

02 能量代谢调控 

miR-7 过表达显著下调线粒体功能相关蛋白 VDAC1、SDHC 的表达，表明线粒体呼吸链功能受损；同时，糖酵解关键酶 ENO2、PDK1 的蛋白水平明显降低，其中 ENO2 作为 GBM 预后相关分子，其表达下调直接印证 miR-7 对糖酵解的抑制作用（图5D、F）。

图5. miR-7 对糖酵解的抑制

03 ECM重塑

在异种移植模型中，ECM 重塑相关蛋白 LGALS8的表达显著降低（Suppl Fig. 9C），提示 miR-7 通过下调该蛋白影响 ECM 与肿瘤细胞的相互作用，进而抑制肿瘤侵袭。

图6. 在异种移植肿瘤中的 LGALS8 基因表达情况

参考文献：

https://doi.org/10.1186/s13046-025-03504-6

LICOR Odyssey系统在Western Blot成像中的优势

1、LICOR Odyssey能够在同一张膜上同时成像多个条带，无需剪膜，满足了期刊杂志对于目的蛋白和内参蛋白在同一膜上成像的要求。

2、在进行蛋白质磷酸化Western Blot分析检测时，LICOR公司的Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测方法使用不同荧光基团标记的二抗，即可同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平，因为无需进行剥离及再孵育，缩短了磷酸化蛋白检测的时间，实现了高效便捷的磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平检测，同时蛋白定量更为准确。

3、LICOR Odyssey还能实现高通量Western Blot检测，称为In-Cell Western，其具有广泛的应用领域，包括药物筛选、细胞信号通路研究、病毒感染研究、疾病研究、药物治疗效果评估以及基础细胞生物学研究等诸多领域。更重要的是，它还是美国药典官方推荐的胰岛素检测技术。这种多功能性和权威认可，使In-Cell Western技术成为了现代生物医学研究和药物开发中的不可或缺的工具。

关于Odyssey

LICOR Biosciences公司的Odyssey® 红外激光成像系统可以实现定量Western Blot检测，具有重复性好、定量准确、 多色荧光成像、背景低、灵敏度高、可直接检测、应用范围广等多种优势，其不仅可以进行孔板的In-Cell Western检测，还可以实现近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、组织切片成像、On-Cell Western、EMSA/凝胶迁移实验、荧光蛋白质芯片、荧光核酸芯片、考染胶成像、器官成像等多种应用。

Odyssey家族

关于基因

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