造血祖细胞(HPCs)与单核细胞(MNCs)在4℃储存条件下的功能与分子稳定性研究

为解决造血祖细胞(HPCs)和单核细胞(MNCs)在临床储存中的稳定性问题，研究人员通过多组学分析评估了4℃条件下0-4天的细胞表型与转录组变化。结果显示HPCs在24小时内即出现显著转录组改变，而MNCs表型稳定长达4天。该研究为细胞治疗产品的质量控制窗口提供了关键数据，发表于《Immunobiology》。

　　

在细胞治疗领域，造血祖细胞(HPCs)和单核细胞(MNCs)是骨髓移植和CAR-T等疗法的核心原料。然而这些珍贵细胞在采集后常面临"时间窗口困境"——当采集结束时间较晚时，能否延迟质量检测？储存期间细胞功能会如何变化？现有研究对HPCs和MNCs在短期冷藏中的分子稳定性认知仍存在空白。

美国国立卫生研究院临床中心的Jinxia Ma、Ping Jin团队在《Immunobiology》发表的研究给出了答案。研究人员设计了一项精细的时序实验：从7例健康供者的HPC产品和6例癌症患者的MNC产品中各取样本，在4℃储存条件下，于0-4天共5个时间点进行"三位一体"检测——采用全自动血液分析仪(ADVIA)进行白细胞(WBC)计数，通过7-AAD染色结合流式细胞术评估活力，并运用高通量RNA测序(RNA-seq)解析转录组动态。

2.1 样本收集

研究纳入7例健康供者HPCs(平均年龄33.1岁)和6例肿瘤患者MNCs(平均54.3岁)，所有样本在采集后4小时内完成分装，建立标准化检测流程。

2.2 WBC计数

数据显示HPCs的WBC计数(1.8-4.0×10⁸/mL)显著高于MNCs(0.43-1.3×10⁸/mL)，但两组在4天内均保持稳定，个体内波动无统计学意义。

2.3 细胞活力

7-AAD检测揭示活力呈时间依赖性下降：HPCs第0天>99%，第3天>90%，第4天降至87%；MNCs趋势相似但降幅更缓，第4天仍保持91%。值得注意的是，所有样本在第3天均维持90%以上存活率。

2.4 免疫表型分析

流式检测显示CD34⁺细胞比例在HPCs中保持稳定，CD3⁺T细胞轻微减少但无统计学意义。MNCs的CD4⁺、CD8⁺等标志物同样呈现惊人稳定性，证明表型特征可耐受4天冷藏。

2.5 转录组分析

RNA-seq数据揭示关键差异：HPCs在PC1(57%方差)和PC2(18.1%方差)维度呈现明显时间轨迹，第1天即出现100个差异表达基因(DEGs)，涉及GPI锚定蛋白、维生素转运和TGF-β信号通路；而MNCs样本则紧密聚类，转录组保持"冷冻"状态。

这项研究首次系统揭示了HPCs与MNCs在短期储存中的"分子时钟"差异：虽然两者表型标志物和WBC计数可稳定维持3-4天，但HPCs的转录组在24小时内就开始"走样"。这提示临床实践中，HPCs若需用于基因治疗或功能研究，应在采集后立即处理；而MNCs的质量检测窗口可适当放宽。研究团队特别指出，当储存超过72小时时，活力下降可能成为限制因素，建议根据具体应用场景权衡检测时效性与数据可靠性。

该成果为细胞治疗产品的标准化储存提供了重要基准数据，其创新性体现在三个方面：首次建立HPCs/MNCs多组学稳定性图谱；发现HPCs分子层面的"早期敏感期"；提出差异化的质量控制时间窗口。这些发现将优化临床细胞产品的处理流程，特别是在跨机构运输、夜间采集等特殊场景中具有直接指导价值。