白藜芦醇通过调控JNK/Bax信号通路抑制血管平滑肌细胞成骨分化、钙化和凋亡的机制研究

本研究揭示了白藜芦醇（Res）通过抑制JNK/Bax信号通路，显著改善血管平滑肌细胞（VSMCs）的成骨分化、钙化和凋亡过程。通过体外钙化培养基（CM）诱导和大鼠体内维生素D3模型验证，Res可降低钙沉积、碱性磷酸酶（ALP）活性及Runx2/BMP2/Osterix表达，为血管钙化的临床干预提供新靶点。

　　

1 引言

血管钙化是慢性肾病、糖尿病和动脉粥样硬化的常见并发症，其特征是血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样表型转化。近年研究发现，这一过程与VSMCs凋亡及JNK/Bax信号通路激活密切相关。白藜芦醇（Resveratrol, Res）作为天然多酚化合物，虽在心血管保护中作用显著，但其对血管钙化的调控机制尚不明确。

2 材料与方法

研究采用大鼠VSMCs钙化模型（含10 mM β-甘油磷酸盐和3 mM CaCl₂的钙化培养基CM）和维生素D₃诱导的小鼠主动脉钙化模型。通过CCK-8检测细胞活性，阿尔新红染色定量钙沉积，Western blot分析Runx2、BMP2、Osterix及JNK/Bax蛋白表达，TUNEL染色评估凋亡。分子对接预测Res与JNK的结合模式。

3 结果

3.1 CM诱导VSMCs成骨分化与凋亡

CM处理10天后，VSMCs钙沉积增加3.5倍（p<0.001），ALP活性升高2.8倍，Runx2/BMP2/Osterix mRNA和蛋白表达显著上调。TUNEL阳性细胞比例增加至35%，caspase-3活性提升2.2倍，证实凋亡参与钙化起始。

3.2 Res抑制钙化与表型转化

10 μM Res处理使CM组的钙含量降低62%（p<0.001），ALP活性下降54%，并下调成骨标志物表达。免疫荧光显示Runx2荧光强度减弱60%，凋亡细胞比例减少至12%。

3.3 Res靶向JNK/Bax通路

分子对接显示Res与JNK结合能为-7.783 kcal/mol，形成4个氢键（MET111/GLU109等）。Western blot证实Res使p-JNK和Bax蛋白水平分别降低48%和52%（p<0.01）。

3.4 JNK抑制剂的协同效应

JNK抑制剂SP600125使CM组的钙沉积减少75%，ALP活性下降68%，并阻断凋亡。而JNK激活剂Anisomycin可逆转Res的保护作用，使钙含量回升至CM组水平的85%。

3.5 动物模型验证

Res处理使维生素D₃小鼠主动脉钙化面积减少58%（von Kossa染色），ALP活性降低49%，主动脉组织中p-JNK和Bax表达分别下调51%和47%。

4 讨论

本研究首次阐明Res通过直接结合JNK抑制其磷酸化，进而阻断Bax介导的凋亡级联反应，最终抑制VSMCs成骨分化和钙化。该发现为血管钙化的靶向治疗提供了实验依据，未来需进一步探索Res对血管弹性和血流动力学的改善作用。