三级淋巴结构（TLS）特征预测BRAF突变结直肠癌患者预后的多组学分析

这篇研究通过多组学分析揭示了三级淋巴结构（TLS）在改善BRAF突变结直肠癌（CRC）患者预后中的关键作用。研究结合单细胞RNA测序（scRNA-seq）、TCGA队列数据及200例临床样本的病理评估，构建了基于10个TLS相关基因（如CCL19、ICOS等）的预后模型，证实TLS的高丰度与成熟度可显著抵消BRAFV600E突变的不良预后效应，为CRC免疫治疗策略提供了新靶点。

　　

引言

结直肠癌（CRC）是全球高发恶性肿瘤，BRAF突变（尤其是V600E亚型）患者预后极差。三级淋巴结构（TLS）作为肿瘤微环境（TME）中的免疫细胞聚集体，在多种癌症中与免疫治疗响应和生存改善相关。本研究首次系统探讨TLS是否可逆转BRAF突变CRC的恶性进展。

材料与方法

研究整合了5个scRNA-seq数据集（GSE146771等）和TCGA-COAD队列的转录组数据，通过LASSO回归筛选出10个TLS核心基因（如CCL19、CCL22、ICOS等）构建预后模型。临床验证纳入200例CRC患者的组织样本，通过H&E和免疫组化（IHC）评估TLS的分布、数量及成熟度（分为AGG、FOL-I、FOL-II亚型）。

结果

1. TLS预后模型的构建与验证

TLS^High组患者总生存期（OS）显著优于TLS^Low组（P<0.0001）。模型在1/3/5年预测的AUC均达0.7以上。单细胞分析显示，TLS^High肿瘤中CD4⁺记忆T细胞、B细胞活性增强，且免疫检查点分子（如PDCD1、CTLA4）表达上调。

2. BRAF突变与TLS的拮抗效应

BRAF^MT肿瘤中TLS数量减少且成熟度降低（FOL-I占比仅38% vs. BRAF^WT的86%）。但BRAF^MT TLS^High患者OS与BRAF^WT TLS^Low组无差异，提示TLS可中和BRAF突变的不良影响。

3. 免疫微环境重塑机制

TLS^High组富集补体通路和炎症反应基因，而TLS^Low组激活KRAS信号和上皮-间质转化（EMT）。细胞互作分析揭示，TLS^High组中CD4⁺ T细胞与B细胞通过CD86-CD28/CTLA4轴增强协同抗肿瘤应答。

4. 治疗意义

TLS^Low组对靶向药（如AZD4547）和化疗药（如环磷酰胺）耐药性更强（IC50升高）。相反，TLS^High状态可能增强免疫检查点抑制剂（ICI）疗效。

讨论

本研究首次阐明TLS通过招募效应免疫细胞、抑制MAPK通路活性，部分逆转BRAF^MT CRC的免疫抑制微环境。局限性在于回顾性分析和小样本BRAF^MT TLS^High亚组，未来需空间转录组学进一步验证。

结论

TLS特征可作为BRAF突变CRC的新型预后标志物，其诱导策略或为改善该类患者免疫治疗响应的关键突破口。