三叶五加标准化叶提取物及其制剂对HepG2细胞的保肝作用机制研究

本研究针对传统泰国药用植物三叶五加(Acanthopanax trifoliatus)的叶提取物及其制剂开展系统性研究，通过建立标准化质量控制体系，证实其具有显著抗氧化活性（DPPH清除EC50 38.88±1.19 μg/mL），并在t-BHP诱导的HepG2细胞模型中展现出剂量依赖性保肝作用（12.5-100 μg/mL降低肝毒性30-40%）。研究首次阐明其通过上调抗氧化基因（CAT、SOD-1、NQO-1）、抑制凋亡基因（AIFM-1、BAK-1、CASP-8/3）及调节BCL-2表达的多靶点机制，为开发植物源保肝制剂提供科学依据。

　　

在传统泰国医学中，三叶五加（Acanthopanax trifoliatus）被称为"phak-paem"，其叶片长期被用作改善体质虚弱和治疗肺部疾病的草药，嫩芽更是泰国北部特色食材。尽管民间应用历史悠久，但关于其保肝作用的科学证据仍属空白。随着现代生活节奏加快，化学性肝损伤问题日益突出，开发安全有效的植物保肝制剂成为研究热点。这项发表在《BMC Complementary Medicine and Therapies》的研究，首次系统揭示了三叶五加叶提取物的保肝机制。

研究团队采用标准化提取工艺，通过HPLC指纹图谱控制质量（含1.33 g%单咖啡酰奎宁酸、1.82 g%双咖啡酰奎宁酸）。关键技术包括：1）建立t-BHP诱导的HepG2细胞氧化损伤模型；2）流式细胞术检测ROS水平和细胞凋亡；3）qPCR分析抗氧化/凋亡相关基因表达；4）开发片剂、饮料和泡腾片三种剂型并评估稳定性。

【质量标准化研究】

通过宏观/微观鉴定确保原料一致性，控制干燥失重（13.66%）、总灰分（10.23%）等物理参数。TLC和HPLC分析显示特征性酚酸和黄酮成分，总酚含量达13.44 g% CAE（氯原酸当量）。DPPH清除实验证实提取物（EC₅₀ 38.88 μg/mL）及制剂具有强抗氧化活性，片剂（62.99 μg/mL）和饮料（81.19 μg/mL）效果显著。

【保肝作用验证】

在t-BHP诱导的肝细胞损伤模型中，50 μg/mL提取物预处理使凋亡细胞从40%降至14%，效果优于阳性对照水飞蓟素。三种制剂在12.5-100 μg/mL范围内均显示5-25%保护率。流式检测发现提取物使ROS阳性细胞减少至53.3%，饮料制剂达75.16%。

【分子机制解析】

qPCR揭示提取物显著上调CAT（过氧化氢酶）、SOD-1（超氧化物歧化酶-1）和NQO-1（NADPH醌脱氢酶-1）表达，分别增强2.5倍、1.8倍和2.1倍。同时抑制促凋亡因子AIFM-1（凋亡诱导因子）和BAK-1（Bcl-2拮抗剂）表达，降低CASP-8/3（半胱氨酸蛋白酶）活性，并提升抗凋亡蛋白BCL-2水平1.7倍。

该研究首次建立三叶五加叶提取物的标准化质量控制体系，阐明其通过"抗氧化-抗凋亡"双通路发挥保肝作用的分子机制。开发的片剂（250 mg/片，崩解时间401秒）和饮料（100 mg/100 mL）兼具良好稳定性与生物活性，为植物源保肝功能食品开发提供范例。特别值得注意的是，双咖啡酰奎宁酸成分（isochlorogenic acid）首次被证实是该植物保肝活性的关键物质基础，这为后续活性成分定向富集工艺开发指明方向。