新型RNA连接酶的筛选与应用：推动环状mRNA合成技术革新

本文系统评估了多种RNA连接酶（包括Ng、Rm、Mt等）在环状mRNA（circRNA）合成中的效率，发现其性能超越传统T4连接酶，为circRNA在疫苗开发、蛋白替代疗法和基因编辑等领域的应用提供了更优工具。研究通过体外酶活比较、细胞翻译实验和小鼠模型验证，证实新型连接酶可提升circRNA产率1.95倍，具有重要转化医学价值。

　　

Highlight

环状RNA（circRNA）因其独特的闭合结构和稳定性特征展现出广阔的生物医学应用前景。在现有circRNA制备方法中，T4连接酶虽已成功应用，但开发更多高效RNA连接酶仍是领域突破的关键。

CircRNA连接酶筛选

由于circRNA缺乏线性mRNA的5'端帽结构，内部核糖体进入位点（IRES）是其翻译的唯一途径。为筛选高效circRNA合成工具，本研究构建了含MCDV IRES序列的mRNA前体，系统比较了7种新型RNA连接酶（包括奈格里虫（Naegleria gruberi, Ng）、嗜热自养甲烷杆菌（Methanothermobacter thermautotrophicus, Mt）和海洋红嗜热菌（Rhodothermus marinus, Rm）来源酶）与T4连接酶的活性。凝胶电泳、细胞表达实验显示，Ng、Rm和Mt连接酶的环化效率与商业T4酶相当，其中Ng酶产物在细胞内蛋白表达量达T4酶的1.95倍。

Conclusion

本研究首次证实Ng、Rm和Mt等新型RNA连接酶在circRNA合成中的卓越性能，其介导生成的circRNA在小鼠模型中展现出更强的功能持续性。该发现为circRNA在疫苗（如长效抗原递送）、基因治疗（如"百宝箱"递送系统）等领域的应用提供了更优解决方案。