基于超高效体积排阻色谱-紫外折光联用技术的壳聚糖乙酰化度精准测定新方法

本文推荐一种创新的超高效体积排阻色谱联用紫外/折光检测（UHPSEC-UV-RI）技术，可快速、精准测定壳聚糖乙酰化度（DA）。该方法仅需微克级样品，无需复杂前处理，其重复性与1H NMR和酶解质谱指纹法（EMS-FP）相当，为壳聚糖结构表征提供了高通量解决方案，将显著提升其在生物医学、农业等领域的应用可靠性。

　　

亮点

我们开发了一种结合超高效体积排阻色谱（UHPSEC）与紫外（UV）、折光（RI）双检测的创新方法，用于壳聚糖乙酰化度（DA）的精准测定。该方法通过UV信号量化乙酰基团（DA指标），RI信号评估样品总量，仅需微量样本即可实现高通量分析。

壳聚糖样本

研究采用商业化和实验室自制的不同分子量（60-650 kDa）、DA（0-55%）及制备方法（异相脱乙酰、均相脱乙酰、化学N-乙酰化）的壳聚糖聚合物，其DA值已通过酶解质谱指纹法（EMS-FP）和¹H核磁共振（NMR）预先标定。分子量通过多角度激光光散射联用体积排阻色谱（SEC-MALLS-RI）测定。

DA标准曲线建立

所有样本以假设纯度90%、含水量10%的条件注入UHPSEC-UV-RI系统。选用低浓度醋酸铵/醋酸溶剂（pH 4.5）确保210 nm处GlcNAc特征紫外吸收。通过RI峰面积校正样本浓度差异，构建DA与UV/RI信号比的线性标准曲线（R²>0.99），成功克服传统方法对精确浓度测定的依赖。

结论

UHPSEC-UV-RI技术具有三大突破性优势：1）无需样本严格纯化，耐受盐分污染；2）仅需微克级样品；3）可实时监测酶促反应中DA动态变化。该方法将显著推动壳聚糖在药物递送、植物抗病诱导等领域的标准化应用。