疟疾传播阻断疫苗靶点AsSGU蛋白的克隆表达、纯化及免疫原性分析

本文聚焦疟疾传播阻断疫苗(TBV)候选靶点——按蚊中肠特异性分泌糖缀合物AsSGU（Anopheles stephensi Secretory Glycoconjugate）的生物学功能研究。通过克隆表达assgu基因（511bp ORF），在E. coli BL21(DE3)中成功获得0.2mg/L分泌型重组蛋白。实验证实该GPI锚定蛋白在血餐后72小时内表达显著上调，与疟原虫（Plasmodium）动合子入侵过程密切相关。免疫学分析显示其具有激发抗中肠免疫的潜力，为开发广谱TBV提供新策略。

　　

研究亮点

蚊虫饲养

实验采用An. stephensi按蚊，在28±2°C、75±5%湿度的可控昆虫室内培育。羽化第5天的雌蚊以兔血饲喂（实验兔来源自LUVAS研究中心），共使用6只新西兰兔（2只空白对照/2只PBS对照/2只实验组）。

基因扩增与保守性分析

扩增获得的assgu基因全长1048bp，包含511bp开放阅读框(ORF)及调控元件：启动子区(396-446bp)、5'UTR(447-481bp)和3'UTR(1016-1048bp)。该基因GC含量>55%，在Anopheles/Culex/Aedes三大蚊属中呈现高度保守性，暗示其可作为跨物种TBV靶点。

讨论

本研究首次在An. stephensi中实现SGU蛋白的原核表达。该蛋白在血餐后中肠表达量激增的特性（72小时达峰），与An. gambiae中报道的动合子入侵抑制机制相呼应。值得注意的是，幼虫唾液腺中的基础表达提示该蛋白可能具有发育阶段双重功能。通过计算机模拟证实，AsSGU可能通过与Agrec47受体或疟原虫Pf47蛋白形成复合物，直接参与动合子穿透中肠上皮的生物学过程。

结论

AsSGU蛋白在主要疟疾媒介中的高度保守性及其血餐诱导表达特性，使其成为极具潜力的广谱传播阻断疫苗靶点。当前细菌表达产量为0.2mg/L，需通过培养条件优化提升产率。后续研究将聚焦于该蛋白与疟原虫表面蛋白的相互作用机制，为开发多阶段靶向疫苗提供理论依据。