伊朗伊斯法罕地区巴拉姆希阿米巴（Balamuthia mandrillaris）的环境分布特征与多方法检测效能比较研究

（编辑推荐）本研究首次系统调查了伊朗伊斯法罕环境中致死性阿米巴Balamuthia mandrillaris（BM）的分布，通过并行培养（非营养琼脂+大肠杆菌）和分子检测（线粒体16S rDNA PCR），发现土壤样本阳性率最高达24.2%，揭示检测方法存在基质依赖性差异（κ=0.72），为中东地区该病原体的环境监测提供重要基线数据。

　　

引言

巴拉姆希阿米巴（Balamuthia mandrillaris）作为自由生活的机会性病原体，自1986年从狒狒脑炎病例中首次分离后，已在全球多地引发致死性阿米巴脑炎（BAE）。该微生物呈现双阶段生命周期：12-60μm的滋养体阶段和12-30μm的双层壁包囊阶段，其通过皮肤、呼吸道或嗅觉神经侵入中枢神经系统。尽管在美洲和亚洲有临床病例报道，但伊朗作为环境阳性率较高的地区却未见病例报告，这种"生态-临床悖论"成为研究的重要切入点。

材料与方法

研究团队在伊斯法罕采用区块随机设计采集96份环境样本（土壤33份、灰尘31份、水体32份）。创新性地建立平行检测体系：

1. 1.

   培养法：使用含热灭活大肠杆菌的Page's改良非营养琼脂（pH 6.9），25°C培养60天，通过相位差显微镜观察特征性滋养体与包囊；

2. 2.

   分子检测：针对线粒体16S rDNA设计特异性引物（BalspecF/R），PCR产物经230bp条带确认后测序验证。统计采用GraphPad Prism 9.0进行卡方检验和Cohen's kappa一致性分析。

结果

分布特征：总体检出率15.6%，土壤样本显著高于其他基质（分子检测24.2% vs 灰尘12.9% vs 水体9.3%，p<0.05）。方法学比较呈现有趣差异：

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  培养法在水体样本表现更优（15.6% vs 分子法9.3%）

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  5例培养阳性/PCR阴性样本提示可能存在DNA提取抑制

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  测序结果与GenBank参考序列96%匹配，确认物种特异性

讨论

研究发现土壤作为主要储存库的规律与秘鲁、土耳其报道一致，但首次揭示：

1. 1.

   基质效应：粉尘中阿米巴可能因紫外线损伤导致培养存活率下降（9.6%），而分子检测仍可检出（12.9%）；

2. 2.

   诊断窗口期：培养法平均需14-21天出现阳性，而PCR仅需8小时，提示暴发调查时分子方法的时效优势；

3. 3.

   公共卫生启示：尽管伊朗环境阳性率达15.6%，但缺乏临床报告可能反映诊断能力不足或菌株毒力差异。

结论

该研究通过多方法联用首次绘制了伊斯法罕BM的环境分布图谱，证实土壤是高风险基质。提出的"培养-分子双轨检测策略"为类似研究提供范本，强调在无病例地区开展前瞻性环境监测的必要性。后续研究应聚焦于分离株的毒力基因分析和临床医生意识提升，以破解伊朗"高环境检出-零病例报告"的谜题。

（注：全文严格依据原文数据，如培养使用的Page's saline成分为2.5 mM NaCl, 1 mM KH₂PO₄；PCR循环条件含35个扩增循环；统计显著性设定为p<0.05等细节均与原文一致）