TGF-β扩增的中央记忆型Vγ9Vδ2 γδ T细胞通过多机制协同增强抗转移性骨肉瘤的体内疗效

这篇综述揭示了TGF-β扩增的Vγ9Vδ2 γδ T细胞通过诱导中央记忆表型（CD45RO+CCR7+）和降低终末分化标志物（CD57/KLRG1），显著提升细胞持久性和骨髓归巢能力。结合唑来膦酸（ZOL）上调肿瘤磷酸抗原（pAgs）和异环磷酰胺（IFO）诱导NKG2D配体表达的双重增敏策略，该方案在骨肉瘤（OS）肺转移模型中实现协同抗肿瘤效应，为低免疫原性实体瘤的过继细胞免疫治疗（ACT）提供新范式。

　　

引言

骨肉瘤（OS）作为最具侵袭性的儿童骨恶性肿瘤，五年生存率在高危转移患者中不足30%。尽管免疫治疗如CAR-T和检查点抑制剂在血液瘤中取得突破，但OS的低免疫原性和异质性导致传统疗法进展停滞。Vγ9Vδ2 γδ T细胞因其HLA非依赖的肿瘤识别机制和双重免疫特性成为新希望，但其终末分化表型导致的体内持久性不足制约疗效。

材料与方法

研究采用NSG小鼠模型和人源OS细胞系（143B/U2-OS），通过Ficoll密度梯度离心从健康供体PBMCs中扩增γδ T细胞。实验组在标准ZOL+IL-2基础上添加TGF-β±IL-15，对比不同培养基（OpTmizer/RPMI+10%FBS）对细胞表型的影响。通过流式检测记忆标志物（CD45RO/CCR7）、细胞毒性（Annexin V/7-AAD）及应激抗原（ULBP1/MICA/B）表达，并建立皮下/肺转移模型评估体内疗效。

结果

1. 1.

   ZOL通过γδ TCR通路增强肿瘤敏感性

   5μM ZOL预处理使OS细胞磷酸抗原累积，γδ T细胞对143B的杀伤率在E:T=5:1时提升2.3倍，但NKG2D配体未见显著上调，证实杀伤依赖BTN3A1-γδ TCR轴而非应激通路。

2. 2.

   IFO诱导免疫识别双激活

   Pal-IFO（IFO活性代谢物）在100μM时使ULBP1表达量增加4.8倍，通过NKG2D受体提供第二杀伤信号。R2数据库分析显示OS组织基线MICA/B mRNA水平较正常组织高3.1倍（p<0.01）。

3. 3.

   TGF-β驱动记忆表型重编程

   OpTmizer培养基中TGF-β组获得最高细胞数（1×10⁹），中央记忆亚群（CD45RO⁺CCR7⁺）占比达58%，较对照组提升3.2倍。冷冻复苏后仍保持骨髓浸润优势（6天时检出量高4.7倍，p<0.001）。

4. 4.

   协同治疗突破生存瓶颈

   肺转移模型中，TGF-β扩增细胞+ZOL/IFO组小鼠50天生存率达83%，显著高于对照组（p<0.0001）。IVIS成像显示肿瘤灶从肺部向肝脏转移，提示治疗引发免疫编辑。

讨论

该研究创新性揭示：

• •

  TGF-β虽下调CD16/CD56，但通过CCR7⁺表型延长体内半衰期，突破终末分化瓶颈；

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  ZOL/IFO双敏化策略覆盖γδ TCR和NKG2D双重识别机制；

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  血清游离培养基（OpTmizer）兼容GMP生产，为临床转化铺路。

展望

未来需探索TGF-β脉冲式刺激以保留ADCC功能，或联合CD16-CAR工程化改造。当前成果已推动首项γδ T细胞治疗复发/难治OS的I期临床试验（NCT05400603），为实体瘤免疫治疗提供新武器。