STING与非坏死性MLKL介导的树突状细胞成熟机制协同增强肿瘤细胞杀伤作用

（编辑推荐）本研究揭示了caspase抑制通过激活RIPK1/3-MLKL-STING信号轴驱动树突状细胞（DC）非坏死性成熟的新机制，该过程无需外源性刺激（如LPS/TNF-α）。研究发现成熟DC分泌的TNF-α与caspase抑制协同诱导肿瘤细胞坏死性凋亡（necroptosis），为STING通路与坏死性凋亡途径的交叉调控提供了新见解，为肿瘤免疫治疗靶点开发开辟了新思路。

　　

ABSTRACT

cGAS-STING通路激活通过促进肿瘤浸润性树突状细胞（DC）成熟在抗肿瘤免疫中起关键作用。研究发现caspase抑制剂zVAD可独立诱导DC成熟，该过程依赖RIPK1/3-MLKL信号轴与STING通路的协同作用。值得注意的是，这种激活不引发DC死亡，揭示了MLKL在非坏死性功能中的新角色。在DC与肿瘤细胞共培养体系中，caspase抑制通过DC分泌的TNF-α驱动肿瘤细胞坏死性凋亡，形成双向调控机制。

1 Introduction

肿瘤微环境（TME）中，细胞死亡释放的双链DNA（dsDNA）可被DC通过cGAS识别，生成第二信使cGAMP激活STING通路。研究聚焦caspase-8抑制如何通过RIPK1-RIPK3-MLKL级联与STING通路交互，该机制在DC中尚未明确。实验假设caspase抑制可能通过非经典途径激活DC，并影响肿瘤细胞命运。

2 Results

2.1 Caspase Inhibition Drives Dendritic Cell Maturation

zVAD处理小鼠骨髓源DC（BMDC）和人单核源DC（moDC）后，MHC-II、CD86、CD40表达显著上调，且与处理时机无关。DNase I处理未影响成熟，排除了死亡细胞DNA的干扰。特异性caspase-8抑制剂重现了该现象，证实核心机制依赖于caspase-8抑制。

2.2 zVAD-Driven Dendritic Cell Maturation Is Dependent on STING Signaling

STING敲除DC对zVAD和cGAMP刺激无反应，但保留LPS响应能力。共刺激实验显示zVAD显著增强cGAMP诱导的STING/TBK1持续磷酸化（>24小时），且不伴随STING蛋白降解——这与既往报道的moDC结果不同，提示BMDC存在独特调控机制。

2.3 zVAD-Induced Maturation Is Dependent on RIPK1, RIPK3, and MLKL Activity

抑制剂necrostatin-1阻断RIPK1后，zVAD诱导的成熟被抑制。WB检测到zVAD处理4小时后RIPK1（Ser¹⁶⁶）、RIPK3（Thr²³¹/Ser²³²）和MLKL（Ser³⁴⁵）的磷酸化。使用GW806742X（抑制MLKL/RIPK1）可阻断STING/TBK1磷酸化和DC成熟，证实该通路非坏死性功能的关键作用。

2.4 Dendritic Cell and Cancer Cell Co-Cultures with zVAD Stimulation

共培养实验中，zVAD处理的DC通过分泌TNF-α驱动L929肿瘤细胞死亡（TNFR1阻断抗体可逆转此效应）。有趣的是，坏死性凋亡肿瘤细胞上清可独立诱导DC成熟，而GW806742X预处理的DC上清丧失促肿瘤细胞死亡能力，揭示MLKL在DC细胞因子分泌中的调控作用。

3 Discussion

研究首次阐明DC中STING与RIPK1-RIPK3-MLKL通路的非死亡性协同：caspase抑制通过该网络驱动DC成熟，同时DC源性TNF-α与肿瘤细胞caspase抑制协同诱导坏死性凋亡。这种双向效应为联合使用caspase抑制剂与免疫疗法提供了理论依据，特别是针对STING信号缺陷的肿瘤。

4 Methods

实验采用BALB/c和C57BL/6J小鼠BMDC、THP-1巨噬细胞及L929肿瘤细胞模型。通过流式细胞术检测表型，Western blot分析磷酸化事件，GW806742X和necrostatin-1进行通路抑制。值得注意的是，目前小鼠MLKL特异性抑制剂的缺失限制了对MLKL直接功能的深入解析。