优化全视网膜及视神经透明化成像技术：提升再生眼科治疗评估的新方法

本研究通过系统评估五种组织透明化方法（ScaleS/FOCM/OptiMuS/MACS/Visikol HISTO-1），开发出改良版ScaleH方案，显著提升视网膜与视神经的成像透明度（46%）和荧光保留率（32%），为干细胞移植治疗青光眼等视神经病变提供了高分辨率评估工具。

　　

Highlight

透明化技术显著提升视网膜成像效果

为筛选最适合视网膜组织的透明化方案，研究者系统评估了五种快速透明化技术：ScaleS（Hama等，2015）、FOCM（X. Zhu等，2019）、OptiMuS（K. Kim等，2022）、MACS（J. Zhu等，2020）和Visikol HISTO-1（Villani等，2013）。通过定性定量分析发现，ScaleS使视网膜透明度提升46%，免疫组化清晰度增加89%，成为最优基础方案。

改良ScaleH实现长效荧光保存

在ScaleS基础上添加聚乙烯醇（PVA）形成的ScaleH新配方，在保持透明度的同时将荧光衰减降低32%。该方案兼容内源性荧光报告基因（如tdTomato）和免疫标记技术，能清晰显示移植的人源干细胞分化视网膜神经节细胞（RGC），并实现视神经中神经突、小胶质细胞和细胞核的三维成像。

与传统方法的对比优势

相比其他透明化方案，ScaleH在荧光稳定性和光学清晰度方面表现突出，其"自硬化"特性可延长样本保存时间，同时支持免疫染色和天然荧光蛋白的双重检测，为神经生物学研究提供通用解决方案。

结论

ScaleH是适用于全视网膜和视神经成像的高可靠性方案，不仅能精准评估再生眼科治疗中供体细胞的整合情况，其模块化设计还可拓展至其他神经组织研究领域。

Conclusion

ScaleH为全视网膜与视神经成像提供了高分辨率解决方案，其卓越的荧光保留能力和组织兼容性，将推动再生眼科治疗评估和神经科学研究的发展。