溶组织内阿米巴表面脂肽磷酸聚糖(LPPG)与单抗EH5结合机制揭示：α1,6-葡聚糖链作为关键抗原表位的发现及其免疫保护意义

本研究针对溶组织内阿米巴(LPPG)表面抗原表位不明的科学难题，通过酶解实验、糖阵列分析和免疫荧光技术，首次证实单抗EH5通过识别LPPG的α1,6-葡聚糖侧链发挥保护作用，为开发抗阿米巴病糖类疫苗提供新靶点。

　　

研究背景

溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)是导致全球每年约5万例阿米巴痢疾和肝脓肿死亡的肠道寄生虫。其表面覆盖的脂肽磷酸聚糖(LPPG)是一种糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的复杂糖蛋白，具有大量类似葡聚糖的寡糖侧链。尽管早期研究发现针对LPPG的单克隆抗体EH5能显著保护免疫缺陷小鼠免受阿米巴肝脓肿侵害，但该抗体的精确结合靶点长期未知——这既阻碍了疫苗开发，也限制了对其免疫逃逸机制的理解。

关键方法

研究团队采用2-丁醇饱和水提取LPPG，通过Chaetomium gracile葡聚糖酶处理、商业葡聚糖点印迹和ELISA验证结合特性；利用免疫荧光显微镜观察抗体与阿米巴/细菌的相互作用；结合MALDI-TOF质谱和定制糖阵列分析表位结构；采用SCID小鼠模型评估保护效果。

研究结果

2.1 LPPG对葡聚糖酶的敏感性

LPPG经1:100稀释的葡聚糖酶处理后完全丧失与EH5抗体的结合能力，提示其表位可能为α1,6-葡聚糖链而非蛋白质核心。

2.2 EH5抗体与商业葡聚糖的结合

点印迹显示EH5特异性结合100kDa和500kDa高分子量葡聚糖，而高灵敏度ELISA进一步证实其与20kDa葡聚糖的相互作用。

2.3 细菌源性葡聚糖的识别

EH5和商业抗葡聚糖抗体DX1均能结合明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)分泌的胞外葡聚糖，但不识别大肠杆菌培养物。

2.5 葡聚糖抑制实验

预孵育20kDa/500kDa葡聚糖可分别部分或完全阻断EH5与阿米巴表面的结合，竞争性实验验证了表位特异性。

2.7 质谱解析糖链结构

TFA和HF处理释放出含3-21个葡萄糖单元的寡糖链，与预测的(Glcα1,6)_n结构一致，而钪三氟甲磺酸盐处理产生更短链（≤16单元）。

2.8 糖阵列精确表位定位

EH5特异性识别含3-5个α1,6-连接葡萄糖的短链，但不结合纤维素型β1,4-葡聚糖或复杂N-聚糖。

结论与意义

该研究首次证实EH5通过识别LPPG的α1,6-葡聚糖侧链而非蛋白质核心发挥保护作用，解释了其交叉反应性（如与细菌葡聚糖结合）和高效免疫保护机制。这一发现具有双重价值：

1. 1.

   治疗应用：为设计基于葡聚糖表位的疫苗提供精确靶点，尤其针对侵袭期高表达的LPPG；

2. 2.

   进化意义：揭示阿米巴可能利用低免疫原性葡聚糖"糖盔甲"逃避免疫监视，这种策略与医用葡聚糖血浆扩容剂的低抗原性原理相似。

论文创新性在于突破性发现糖类表位（而非传统认知的蛋白表位）的关键保护作用，相关成果发表于《Carbohydrate Research》，为抗寄生虫糖免疫学研究开辟新方向。