梯度PLE-SPE×HPLC-PDA联用技术高效提取与分馏可可豆壳高值化合物：绿色化学与精准分析新策略

（编辑推荐）本研究创新性开发梯度PLE-SPE×HPLC-PDA联用系统，实现可可豆壳(CBS)中可可碱(theobromine)、咖啡因(caffeine)及酚类物质的同步提取、富集与实时分析。采用PoraPak Rxn RP Bulk吸附剂和H2O/EtOH梯度洗脱，获得纯度达75-81%的目标组分，并通过COSMO-RS理论模拟分子相互作用，为农业副产物高值化提供绿色解决方案。

　　

Highlight

本研究升级了梯度PLE-SPE×HPLC-PDA系统，用于可可豆壳(CBS)中高值化合物的提取、浓缩、分馏与分析。通过优化在线PLE-SPE条件（采用PoraPak Rxn RP Bulk吸附剂，45分钟H₂O→EtOH梯度洗脱），成功获得三个高纯度组分：可可碱富集相（75.05±9.22%）、咖啡因富集相（80.66±1.95%）和酚类富集相（69.21±7.46%）。该系统支持吸附剂重复使用10次以上，并通过实时HPLC-PDA监测性能。

Chemicals and plant material

实验采用Sigma-Aldrich提供的标准品（可可碱≥98%、咖啡因≥98%等），Merck色谱级乙腈/乙酸，以及巴西产乙醇（EtOH≥99.5%）。可可豆壳原料经冷冻干燥粉碎后过40目筛备用。

Optimization of EtOH:H₂O gradient mode in PLE

通过全因子设计(FFD)评估温度(x₁)、初始静态时间(x₂)等变量对提取效率的影响。结果显示温度(x₁)对目标物得率呈显著正效应(p<0.05)，而乙醇终浓度(x₄)会抑制酚类提取——这为梯度程序优化提供了关键依据。

Conclusion

该研究建立的集成化分析方法显著减少了处理步骤和时间，采用绿色溶剂(H₂O/EtOH)和可循环吸附剂，符合绿色化学原则。所得高纯度组分在食品、化妆品及制药领域具有广阔应用前景。