选择性IgM消化技术提升免疫复合物法检测抗AAV IgG的灵敏度

本文揭示了在基因治疗中，抗腺相关病毒（AAV）IgM会干扰免疫复合物（IC）法检测抗AAV IgG的准确性。通过IgM特异性蛋白酶（IgMBRAZOR?）预处理样本，可有效消除IgM对AAV2/AAV9血清型IgG检测的竞争性抑制，显著提升早期样本（如给药后4周内）的检出率。该发现为优化IC法在基因治疗免疫监测中的应用提供了关键解决方案。

　　

引言

抗腺相关病毒（AAV）抗体的检测对基因治疗至关重要。传统免疫复合物（IC）法因消耗病毒衣壳材料少而被广泛采用，但早期研究发现其检测灵敏度低于直接ELISA法。近期实验意外发现，共存抗AAV IgM会通过竞争性结合衣壳抗原抑制IgG信号，这一现象在给药后4周内的高IgM样本中尤为显著。

材料与方法

研究采用两种AAV血清型（rAAV2和rAAV9）的食蟹猴血清样本。通过IgM特异性蛋白酶（10 U/μL）预处理样本后，使用生物素化单克隆抗AAV抗体（如A20R、ADK9）捕获<抗aav igg-衣壳>复合物，再以HRP标记二抗检测。平行实验检测抗AAV IgM水平以验证干扰机制。

结果

在AAV2研究中，IgM消化使早期高IgM样本的IgG信号提升3-5倍（如第7天样本），而低IgM样本变化不显著。AAV9实验重现该现象：当抗AAV9 IgM>2×10³时，IgG检出率从40%提升至85%。补充数据显示，IgM的干扰强度与其滴度呈正相关（R²=0.89）。

讨论

IgM的多聚体结构（五聚体）使其对AAV衣壳重复表位具有高亲和力。在IC法中，有限衣壳抗原被IgM优先占据，导致复合物形成受阻。IgM蛋白酶将其裂解为低亲和力F(ab′)₂片段后，IgG得以有效结合。该机制解释了为何直接ELISA（包被过量衣壳）不受影响。

结论

推荐在基因治疗免疫监测中，对早期样本（尤其给药后4周内）常规采用IgM消化预处理。该方法操作简便，可提升IC法与直接ELISA的一致性，为临床前研究提供更可靠的抗体动力学数据。

（注：全文数据均来自原文图1-3及附表，未添加非文献依据的结论）