altSonflex1-2-3 GMMA疫苗诱导的抗体对耐药性志贺菌临床分离株的杀菌作用研究

本文报道了四价O抗原（OAg）疫苗altSonflex1-2-3（含S. sonnei和S. flexneri 1b/2a/3a血清型）通过GMMA（广义膜抗原模块）递送系统，在临床前模型中诱导的抗体可有效杀灭耐药性志贺菌流行株。研究通过核磁共振（NMR）和杀菌实验（L-SBA）证实，疫苗OAg结构与临床分离株高度保守，且动物血清杀菌效价与流行区成人自然免疫血清相当，为应对抗菌素耐药（AMR）危机提供了新策略。

　　

引言

志贺菌病每年导致全球2.7亿感染和14.8万死亡，主要影响低收入国家儿童和高收入国家特定高危人群（如旅行者、男男性行为者）。随着氟喹诺酮等抗生素耐药性加剧，WHO将耐药志贺菌列为优先病原体。疫苗研发的关键挑战在于志贺菌O抗原的高度多样性——以S. flexneri为例，其OAg由四糖骨架（→2)-α-l-Rha_pIII-(1→2)-α-l-Rha_pII-(1→3)-α-l-Rha_pI-(1→3)-β-d-Glc_pNAc-(1→）经糖基化和O-乙酰化修饰形成不同血清型。

结果与讨论

OAg结构特征

对12株耐药临床分离株（含MSM相关流行簇）的OAg分析显示：

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  分子量呈双峰分布（48.6-60.5 kDa和13.5-16.1 kDa），仅S. flexneri 6缺失高分子量组分

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  O-乙酰化位点保守，但S. flexneri 1b临床株仅在Rha^I-2位乙酰化，而疫苗GMMA在Rha^III-3位新增修饰

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  S. flexneri 2a疫苗株OAc含量（147%）显著高于临床株（37%-49%）

血清杀菌活性

通过发光法SBA（L-SBA）检测发现：

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  小鼠/兔/大鼠免疫血清对同源1b株和异源3b/4a/Y株均具杀菌活性（IC₅₀与肯尼亚成人血清相当）

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  唯一耐药株S23BD05840（2a血清型）因OAg产量低（242 μg/OD）和补体抵抗特性逃逸杀伤

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  对S. flexneri 6的保护较弱，提示需优化覆盖

方法学亮点

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  OAg提取采用分级纯化策略：酸水解→超滤→离子交换层析（CEX/AEX）

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  L-SBA创新性使用ATP发光信号（BacTiter-Glo）量化活菌，灵敏度优于传统CFU计数

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  动物实验遵循3R原则，血清热灭活（56°C×30 min）去除内源补体干扰

意义与展望

该研究首次系统验证了GMMA疫苗对现实世界耐药株的交叉保护潜力。目前altSonflex1-2-3已进入II期临床试验（NCT06663436/NCT05073003），未来将在婴幼儿中验证其针对流行株的功能性免疫应答。