异鼠李素通过靶向TWEAK/Fn14通路抑制上皮-间质转化缓解肾间质纤维化的机制研究

本研究揭示中药沙棘活性成分异鼠李素（ISO）通过表面等离子共振（SPR）证实与Fn14特异性结合（Kd=5.47 μM），在TGF-β1诱导的HK-2细胞和单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中，显著抑制TWEAK/Fn14/ERK1/2信号通路，降低α-SMA、III型胶原（Col III）和纤连蛋白（FN）表达，上调E-cadherin，从而阻断上皮-间质转化（EMT）进程，为慢性肾脏病（CKD）的纤维化治疗提供新靶点。

　　

1 Introduction

慢性肾脏病（CKD）因其高发病率成为全球公共卫生问题，而肾间质纤维化（RIF）是CKD进展至终末期的共同病理结局。研究团队发现沙棘果实中的黄酮类成分异鼠李素（Isorhamnetin, ISO）具有显著的肾脏保护作用，但其对抗RIF的具体靶点尚未明确。本文聚焦TWEAK（肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂）/Fn14（成纤维细胞生长因子诱导分子14）通路在EMT中的调控作用，通过体外细胞和动物模型揭示ISO的作用机制。

2 Methods

实验采用转化生长因子-β（TGF-β）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）EMT模型和UUO大鼠模型。通过SPR分析ISO与Fn14的相互作用，并利用腺相关病毒（AAV9）过表达Fn14验证靶点特异性。检测指标包括细胞形态（鬼笔环肽染色）、迁移能力（划痕实验）、肾功能指标（血肌酐SCr、尿素氮BUN）及纤维化标志物（Masson染色、Col III/FN免疫组化）。

3 Results

3.1 形态与功能改善

UUO大鼠肾脏出现囊性肿大和皮质变薄，ISO治疗组（25-100 mg/kg）显著降低肾脏指数（KI）和血清SCr/BUN水平（p<0.01），效果与阳性药氯沙坦（Los）相当。

3.2 ECM与EMT调控

免疫荧光显示ISO上调E-cadherin，下调α-SMA（p<0.01）；Western blot证实ISO抑制Col III/FN表达。体外实验中，ISO（2-8 μmol/L）逆转TGF-β1诱导的HK-2细胞纺锤形变，迁移距离减少50%以上。

3.3 靶点验证与通路抑制

SPR分析显示ISO与Fn14强效结合（K_d=5.47 μM）。ISO下调TWEAK/Fn14及其下游TRAF2/BRAF表达，抑制MEK1/2和ERK1/2磷酸化（p<0.05），并减少核内Snail1/β-catenin积累。过表达Fn14完全抵消ISO对ERK1/2磷酸化的抑制作用（p<0.05）。

4 Discussion

研究首次阐明ISO通过直接结合Fn14阻断TWEAK/Fn14/ERK1/2级联反应：

1. 1.

   TWEAK-Fn14结合招募TRAF2，激活BRAF-MEK1/2-ERK1/2轴；

2. 2.

   磷酸化ERK1/2入核增强SP1活性，促进Snail1转录；

3. 3.

   Snail1抑制E-cadherin，释放β-catenin入核形成正反馈，最终驱动EMT和ECM沉积。

5 Conclusion

ISO通过靶向Fn14阻断TWEAK通路，抑制EMT进程和ECM沉积，为RIF治疗提供新型植物药候选分子。未来可进一步优化ISO衍生物以提高Fn14亲和力。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留英文缩写及符号规范。）