miR-378a-5p靶向调控BRAF通过MAPK/ERK通路促进rEg.P29诱导的CD4+T细胞向Th1分化

本研究揭示了重组细粒棘球蚴蛋白P29（rEg.P29）通过上调miR-378a-5p表达，靶向抑制BRAF基因并调控MAPK/ERK信号通路，从而促进小鼠脾脏CD4+T细胞向Th1亚型分化的分子机制。该发现为囊型包虫病（CE）疫苗研发提供了新型免疫调节靶点，具有重要转化医学价值。

　　

Introduction

囊型包虫病（CE）作为全球性人畜共患病，其病原体细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）在宿主体内可长期潜伏。研究团队前期发现重组蛋白rEg.P29能诱导强烈的Th1型免疫应答，并通过miRNA测序鉴定出CD4⁺T细胞中显著上调的miR-378a-5p。

Materials and methods

采用BALB/c小鼠模型，通过弗氏佐剂乳化rEg.P29进行免疫。磁珠分选获得纯度>95%的初始CD4⁺T细胞后，运用双荧光素酶报告系统验证miR-378a-5p与BRAF 3'UTR的直接结合。通过qRT-PCR和Western blot检测MAPK/ERK通路关键分子表达，并构建BRAF过表达（OE-BRAF）和干扰（siRNA-BRAF）载体进行功能回补实验。

Results

1. 1.

   rEg.P29激活miR-378a-5p/BRAF轴

   免疫组小鼠脾脏CD4⁺T细胞中miR-378a-5p表达量较PBS组升高4.3倍（P<0.001），而BRAF mRNA水平下降62%。蛋白互作网络分析显示BRAF与MEK1/2、ERK1/2存在强关联。

2. 2.

   Th1分化调控机制

   转染miR-378a-5p模拟物使IFN-γ分泌量增加2.8倍（P<0.01），T-bet表达上调；同时IL-4蛋白水平降低67%。相反，抑制miR-378a-5p导致Th2标志物GATA-3表达量翻倍。

3. 3.

   通路验证实验

   OE-BRAF使ERK1/2磷酸化水平升高3.2倍，而共转染miR-378a-5p模拟物可逆转该效应。STRING数据库预测的MAPK/ERK通路活性变化与Western blot结果一致。

Discussion

该研究首次阐明rEg.P29通过miR-378a-5p→BRAF→MAPK/ERK信号级联调控Th1分化的分子路线。值得注意的是，miR-378a-5p模拟物与siRNA-BRAF联用可使IFN-γ产生量达到单转染组的182%，证实该通路的级联放大效应。这些发现为开发基于miRNA调控的CE疫苗提供了新思路。

Conclusion

研究证实rEg.P29诱导的miR-378a-5p通过靶向抑制BRAF，下调MAPK/ERK通路活性，从而打破Th1/Th2平衡向保护性免疫方向转化。该机制为寄生虫感染中的免疫逃逸研究提供了新视角，miR-378a-5p或成为CE诊断和免疫治疗的潜在生物标志物。