西达本胺与LB100通过下调TNC和抑制PI3K/AKT/mTOR通路协同治疗Sézary综合征的机制研究

本研究揭示了组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)西达本胺(Chidamide)与蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂LB100在皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)亚型Sézary综合征(SS)中的协同抗肿瘤机制。通过体外细胞实验(Hut78/H9)和体内异种移植模型证实，两药联用能显著下调细胞外基质蛋白Tenascin C(TNC)表达，并抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路磷酸化，诱导肿瘤细胞凋亡(Bcl-2↓/Cleaved-caspase3↑)和周期阻滞。该研究为SS等罕见CTCL亚型提供了新的联合治疗策略。

　　

2 Methodologies and Materials

研究采用SS细胞系Hut78/H9和MF细胞系HH，通过CCK-8法测定细胞活力并计算联合指数(CI<1显示协同效应)。采用流式细胞术检测Annexin V-APC/PI双染的凋亡率，Western blot(WB)分析Bcl-2、Cleaved-caspase3等蛋白表达。转录组测序筛选差异基因，并通过shRNA敲低验证TNC功能。NSG小鼠异种移植模型评估体内疗效。

3 Results

3.1 协同抗增殖效应

西达本胺单药对H9/Hut78的IC₅₀分别为686.0/231.4 nM，联用LB100后显著降低(表1)。克隆形成实验显示450 nM西达本胺+4 μM LB100组合可完全抑制集落形成(图1D-F)。

3.2 协同促凋亡作用

联合组凋亡率显著高于单药组(图2A-B)，WB显示Bcl-2表达降低而Cleaved-caspase3升高，Cyclin D1下调提示G1期阻滞(图2C-E)。

3.3 分子机制探索

转录组测序发现联合组TNC显著下调(图4D)，PI3K/AKT/mTOR通路相关基因富集(图4E-F)。WB和免疫组化(IHC)证实p-PI3K/p-AKT/p-mTOR磷酸化水平降低(图5)。

3.4 TNC的调控作用

shRNA敲低TNC后，PI3K/AKT/mTOR通路磷酸化水平降低，且联合用药敏感性下降(图6)，证实TNC是该通路的上游调控因子。

3.5 体内验证

小鼠模型中联合组肿瘤体积/重量显著减小(图7B/E)，IHC显示肿瘤组织TNC、p-PI3K/p-AKT表达降低，且未出现明显毒性(图7C/F)。

3.6 对其他CTCL亚型的作用

在MF细胞系HH中同样观察到协同效应，提示该方案可能拓展至更广的CTCL治疗(图S4)。

4 Discussion

研究创新性发现：

1）西达本胺通过表观遗传调控可能影响ECM组分(如TNC)表达；

2）LB100作为PP2A抑制剂可双重调控PI3K p110α表达和AKT磷酸化；

3）两药联用通过"TNC↓→PI3K/AKT/mTOR通路抑制→凋亡↑"轴发挥协同作用(图8)。该方案克服了单药治疗SS的局限性，为临床联合用药提供了理论依据。需进一步探索TNC是否通过整合素-FAK轴激活PI3K通路，并扩大至更多CTCL亚型验证。