miR-217通过靶向DNMT1/TSHZ2/Hedgehog-GLI通路调控乳腺导管原位癌的表观遗传机制

本研究揭示了miR-217通过靶向DNA甲基转移酶1（DNMT1）调控乳腺导管原位癌（DCIS）进展的新机制。研究发现miR-217通过抑制DNMT1表达，降低teashirt锌指同源盒2（TSHZ2）启动子区甲基化，进而抑制Hedgehog-GLI信号通路，最终抑制DCIS细胞增殖、迁移和侵袭。该研究为DCIS的靶向治疗提供了潜在新策略。

　　

1 引言

乳腺导管原位癌（DCIS）是非浸润性乳腺癌的前驱病变，具有高进展风险。研究表明异常DNA甲基化在早期肿瘤发生中起关键作用，但其调控机制尚未完全阐明。本研究通过整合生物信息学分析和实验验证，发现miR-217可作为DNA甲基转移酶1（DNMT1）的候选调控因子，并通过DNMT1/TSHZ2/Hedgehog-GLI轴调控DCIS进展。

2 材料与方法

研究收集40例DCIS患者组织样本，通过甲基化测序和转录组数据分析筛选差异甲基化基因。利用ZR-75-1细胞系进行功能验证，包括RT-qPCR、双荧光素酶报告基因检测、甲基化特异性PCR（MSP）和染色质免疫沉淀（ChIP）等实验。裸鼠移植瘤模型用于体内验证。

3 结果

3.1 生物信息学分析

甲基化测序数据发现DCIS组织中TSHZ2启动子区高甲基化，且与DNMT1表达呈负相关。miR-217被预测为DNMT1的上游调控miRNA，且在乳腺癌中低表达。

3.2 miR-217靶向抑制DNMT1

双荧光素酶报告实验证实miR-217直接结合DNMT1的3′非翻译区（3′UTR）。临床样本显示miR-217在DCIS组织中低表达，而DNMT1高表达。细胞实验表明miR-217过表达可显著抑制DNMT1表达。

3.3 miR-217/DNMT1调控TSHZ2表达

DNMT1过表达导致TSHZ2启动子区高甲基化，抑制其转录。MSP和ChIP实验证实miR-217通过抑制DNMT1减少TSHZ2启动子区甲基化，恢复TSHZ2表达。

3.4 TSHZ2抑制Hedgehog-GLI通路

TSHZ2过表达显著降低Hedgehog通路效应分子GLI1和SHH的表达。功能实验显示TSHZ2通过抑制该通路减少DCIS细胞增殖、迁移和侵袭，而通路抑制剂GANT61可增强这一效应。

3.5 体内实验验证

裸鼠移植瘤模型显示，miR-217过表达显著抑制肿瘤生长，伴随DNMT1和GLI1下调及TSHZ2表达升高。TUNEL染色证实miR-217促进肿瘤细胞凋亡。

4 讨论

本研究首次阐明miR-217/DNMT1/TSHZ2/Hedgehog-GLI轴在DCIS中的调控作用。该通路通过表观遗传重编程影响致癌信号，为DCIS的精准治疗提供新靶点。

5 结论

miR-217通过靶向DNMT1调控TSHZ2甲基化和Hedgehog-GLI通路，抑制DCIS恶性进展，具有重要临床转化价值。