南美白对虾冷藏过程中结构蛋白动态降解的显微解析及其与质地劣变的关联：基于组织化学染色与生化分析

本研究通过建立南美白对虾(Litopenaeus vannamei)冷藏过程中结构蛋白降解的组织学可视化方案，采用卡诺伊(Carnoy)固定剂结合马松(Masson)三色染色技术，首次系统揭示了肌原纤维(myofibrils)与胶原蛋白(collagen)的动态降解规律。定量分析显示肌原纤维横/纵截面积分别从(91.03±1.37)%/(93.39±0.91)%骤降至(41.14±3.78)%/(24.36±3.67)%（P<0.01），且与硬度/弹性参数呈显著负相关(P<0.05)，为水产品冷藏保鲜质量控制提供了新型生物标志物。

　　

Highlight

本研究通过系统优化固定剂选择、脱水透明化及染色时长等参数，成功建立了适用于南美白对虾肌肉结构蛋白组分（肌原纤维myofibrils和胶原蛋白collagen）的马松三色染色(Masson's trichrome staining)标准化流程。关键发现显示卡诺伊固定剂(Carnoy's fixative)在维持肌肉形态完整性方面显著优于4%中性甲醛（图1A），而分级乙醇脱水配合二甲苯透明方案能最大限度保留组织微观结构。

Chemicals

实验所用甲醛(formaldehyde)、无水冰醋酸(anhydrous glacial acetic acid)、乙醇(ethanol AR)购自广州百骏科技；苦味酸(picric acid)来自上海阿拉丁生化科技；三氯化铁(anhydrous trivalent iron chloride)和水溶性苯胺蓝(water-soluble aniline blue)分别由上海源叶生物和上海麦克林生化提供。

Effects of pretreatment on the morphology of shrimp muscle

预处理条件筛选实验揭示：布安(Bouin)和卡诺伊(Carnoy)固定剂对肌肉组织形态影响最小，而常规10%福尔马林(formalin)会导致明显收缩变形（图1B）。值得注意的是，分级乙醇脱水(50%→70%→85%→95%→100%)配合短时二甲苯透明(15min)的方案，在保持肌束间隙和肌原纤维排列方面展现出最佳效果（图1C）。马松染色优化结果显示，酸性品红(acid fuchsine)染色5min配合苯胺蓝(aniline blue)复染3min能清晰区分红色肌纤维与蓝绿色胶原网络（图2）。

Conclusion

本研究首次通过标准化组织化学方法动态示踪了冷藏过程中南美白对虾结构蛋白的降解进程，定量证实胶原纤维含量下降与肌原纤维结构破坏存在时序关联。特别发现第5天时胶原面积与硬度参数呈显著负相关(r=-0.82, P<0.01)，表明胶原网络的早期崩解是触发肌肉软化的关键事件。这些发现为水产品冷藏保鲜质量控制提供了新的干预靶点。

Uncited references

（此处按用户要求省略未引用的参考文献列表）

Funding

本研究受广东省自然科学基金(2023A1515010852)资助。

CRediT authorship contribution statement

（此处按用户要求省略作者贡献声明）

Declaration of Competing Interest

所有作者声明不存在利益冲突。