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为解决弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者对一线疗法耐药或复发的问题，研究人员开发了一种基于肿瘤外泌体(Exosome)的靶向递送系统ISOIM/siBTK@Exosome，通过电穿孔技术将天然活性成分异欧前胡素(ISOIM)与布鲁顿酪氨酸激酶(BTK) siRNA共载于外泌体中。该体系在体外和荷瘤小鼠模型中均显示出显著的协同抗淋巴瘤活性，同时能激活T细胞并抑制M2型巨噬细胞极化，为DLBCL的临床治疗提供了新型靶向策略。

　　

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)作为非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常见的亚型，其治疗面临严峻挑战——约三分之一的患者在接受含蒽环类药物的标准化疗后会出现复发或耐药。这种治疗困境与DLBCL的高度异质性密切相关，包括形态学、遗传学和临床特征的多样性。尽管布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)已成为B细胞恶性肿瘤的重要治疗靶点，但现有BTK抑制剂存在脱靶效应和耐药性问题。与此同时，天然活性成分异欧前胡素(ISOIM)虽显示出抗肿瘤潜力，却因分子量小易被肝肾代谢清除。如何突破这些治疗瓶颈？发表在《Materials Today Bio》的研究给出了创新性解决方案。

研究团队采用电穿孔技术、透射电镜(TEM)表征、流式细胞术(FCM)和共聚焦显微镜(CLSM)等关键技术，从DLBCL细胞系SU-DHL-4中分离外泌体，构建了共载ISOIM与si-BTK的纳米递送系统。通过建立OCL-Ly8细胞荷瘤小鼠模型，结合免疫组化、TUNEL染色和Western blot等多维度评估体系，验证了其治疗效果与安全性。

外泌体载药体系的构建与表征

通过差速离心法从SU-DHL-4细胞培养基中分离出直径约117.5 nm的外泌体，电穿孔加载后形成的ISOIM/siBTK@Exosome粒径增至132.4 nm，仍保持典型"碟状"形态。Western blot证实其富含CD63、CD81等外泌体标志物，荧光共定位显示si-BTK成功载入。该体系在生理环境下稳定性良好，且在酸性微环境中释放率可达80%，显著高于生理pH条件。

靶向递送与细胞摄取机制

PKH26标记实验显示，ISOIM/siBTK@Exosome在SU-DHL-4和OCL-Ly8细胞中6小时摄取率超60%，主要通过小窝蛋白介导的内吞途径。活体成像显示其在肿瘤部位富集显著，48小时后主要器官荧光信号微弱，证实了良好的靶向性。

体外抗淋巴瘤效应

50 μg/mL的ISOIM/siBTK@Exosome对两种淋巴瘤细胞的抑制率显著优于单药组，克隆形成数减少70%以上。Transwell实验显示其可抑制80%以上的细胞迁移，Annexin-V/PI检测表明凋亡率提升3倍。Western blot显示该体系能持续下调BTK表达，同时上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2。

免疫微环境调控

与治疗后的淋巴瘤细胞共培养时，CD69⁺CD4⁺和CD69⁺CD8⁺T细胞比例显著增加，而M2型巨噬细胞(CD206⁺)减少40%，表明其具有逆转免疫抑制的潜力。

体内疗效与安全性

在荷瘤小鼠中，ISOIM/siBTK@Exosome治疗组肿瘤体积最小，Ki67表达降低60%，TUNEL显示广泛凋亡。H&E染色证实其对心、肝等主要器官无毒性，实现了治疗安全性的平衡。

这项研究开创性地将肿瘤来源外泌体的天然靶向性与ISOIM/si-BTK的协同效应相结合。外泌体不仅解决了siRNA递送面临的半衰期短、膜穿透性差等难题，其同源靶向特性还显著提升了药物在肿瘤部位的蓄积。ISOIM通过调控c-Myc/SIRT1轴诱导凋亡，而si-BTK则精准抑制BCR信号通路关键节点，这种双通路干预策略为克服DLBCL耐药提供了新思路。尤其值得注意的是，该体系能重塑肿瘤免疫微环境——促进T细胞活化并阻断M2型巨噬细胞极化，这种免疫调节作用可能为联合免疫治疗奠定基础。研究团队Ruowen Sun、Yanchao Yang等通过严谨的实验设计，证实了基于患者自身肿瘤外泌体开发个性化疗法的可行性，为临床转化提供了重要理论依据。