"基于绿色UPLC-PDA技术的喜马拉雅白堇菜多酚同步定量与抗炎机制研究"

本研究开发并验证了一种绿色、快速的UPLC-PDA（超高效液相色谱-光电二极管阵列检测）方法，用于同步定量喜马拉雅白堇菜（Viola canescens）中的酚酸、黄酮和香豆素类化合物。该方法灵敏度高（LOD 0.04–0.58 μg/mL，LOQ 0.12–1.77 μg/mL），符合ICH指南（准确度81.39%–112.60%），并通过AGREE等绿色指标认证（AGREE: 0.64）。研究发现p-香豆酸在花/叶/根中含量最高（10.32/6.87/3.28 mg/g），乙醇提取物可显著抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞中NO生成和IL-6表达（25-50 μg/mL）。分子对接显示芦丁等化合物与COX-2等靶点具有强结合力（-15.867 kcal/mol），为开发抗炎植物药提供新思路。

　　

Highlight

本研究首次建立绿色高效的UPLC-PDA方法，实现喜马拉雅白堇菜中三大类活性成分（酚酸、黄酮、香豆素）的同步检测。方法学验证显示优异性能：色谱峰分离度良好，检测限低至0.04 μg/mL，日内精密度RSD<2%。通过AGREEprep(0.68)等多项绿色指标认证，堪称环境友好型分析技术的典范。

Method development and validation

方法开发阶段，各标准品在UPLC-PDA系统中展现出尖锐对称的色谱峰（保留时间3.814-15.375分钟）。其中原儿茶酸最先洗脱，而山奈酚最后出峰，14种化合物实现基线分离，彰显该方法对复杂植物基质的强大解析能力。

Linearity

线性分析表明所有目标物在0.5-100 μg/mL范围内相关系数R2>0.999，校准曲线呈现完美剂量依赖性。特别值得注意的是，对香豆酸的响应因子最高，这与后续植物样本中其含量优势的结果相互印证。

Discussion

比较研究发现，本研究的白堇菜p-香豆酸含量（10.32 mg/g）显著高于文献报道的其它堇菜属植物。更引人注目的是，其花部提取物在50 μg/mL浓度下对NO的抑制率达82.3%，远超阳性对照吲哚美辛。分子动力学模拟揭示，芦丁通过形成氢键网络稳定结合COX-2活性口袋，这为其抗炎效应提供了结构基础。

Conclusion

作为首篇系统研究喜马拉雅白堇菜抗炎活性的论文，我们不仅建立了经绿色认证的UPLC-PDA金标准方法，更通过巨噬细胞模型和计算机模拟，阐明其通过调控IL-6/COX-2通路发挥抗炎作用的分子机制。其中芦丁（-15.867 kcal/mol）和槲皮素（-9.945 kcal/mol）被预测为关键活性成分，为后续开发植物源抗炎制剂奠定基础。