FUNDC2P4与HSF1通过竞争性调控CBX7转录抑制肝细胞癌射频消融后EMT的机制研究

本文揭示了肝细胞癌（HCC）不完全射频消融（IRFA）后复发转移的新机制：长链非编码RNA FUNDC2P4通过形成RNA-DNA三链体与热休克因子1（HSF1）竞争性结合Chromobox蛋白同源物7（CBX7）启动子区域，从而调控上皮-间质转化（EMT）进程。研究结合转录组分析（RNA-seq）、双荧光素酶报告基因实验及功能验证，首次阐明FUNDC2P4/HSF1/CBX7轴在IRFA后残余HCC细胞增殖侵袭中的协同作用，为临床防治HCC消融后复发提供潜在靶点。

　　

IRFA促进EMT并调控FUNDC2P4与HSF1表达

通过47℃恒温水浴体外模拟IRFA处理，成功构建Huh7-H和HCCLM3-H两种残余HCC细胞模型。Western blot和qRT-PCR显示，IRFA处理后细胞呈现典型EMT特征：上皮标志物E-cadherin表达下调，间质标志物N-cadherin和vimentin显著上调。值得注意的是，IRFA同时导致FUNDC2P4表达降低而HSF1 mRNA及蛋白水平升高，提示二者可能参与EMT调控。

FUNDC2P4的基因组特征与功能初探

生物信息学分析表明，位于22号染色体的FUNDC2P4不具备蛋白编码能力（CPAT评分<0）。RNA荧光原位杂交（FISH）和核质分离实验揭示其双重定位特征——主要富集于细胞核，少量存在于细胞质。过表达FUNDC2P4的Huh7细胞转录组测序发现354个差异表达基因（DEGs），其中EMT抑制因子CBX7和CDH1显著上调。基因集富集分析（GSEA）进一步证实FUNDC2P4可抑制EMT通路激活。

竞争性转录调控机制的发现

LongTarget程序预测FUNDC2P4能在CBX7启动子区（1782-1832 nt）形成RNA-DNA三链体，而JASPAR数据库显示HSF1结合位点（1790-1804 nt）与之存在12bp重叠区。双荧光素酶报告实验证实：FUNDC2P4使CBX7(2K)启动子活性提升3.2倍，HSF1则使其降低67%，共转染时活性恢复至基线水平。截断突变体实验锁定关键调控区域位于CBX7启动子1.5-2K区段。

CBX7介导的EMT抑制效应

LV-CBX7转染的Huh7/HCCLM3细胞中，E-cadherin表达量增加2.1倍，N-cadherin和vimentin分别下降58%和63%。功能实验表明，FUNDC2P4过表达使Huh7-H细胞迁移能力减弱42%，而与HSF1共转染时该效应被逆转；添加CBX7后侵袭性再度受抑。CCK-8实验显示该调控轴对细胞增殖的影响呈相同趋势，证实FUNDC2P4通过拮抗HSF1对CBX7的转录抑制来阻断EMT进程。

转化医学意义与局限

该研究首次揭示IRFA通过FUNDC2P4/HSF1/CBX7分子轴促进HCC转移的机制：热应激诱导的HSF1上调与FUNDC2P4降解打破转录平衡，导致CBX7表达抑制进而激活EMT。尽管缺乏体内实验验证，但发现的核心调控网络为开发联合靶向疗法（如HSF1抑制剂联合FUNDC2P4模拟物）提供了理论依据，对改善HCC患者消融后预后具有重要临床价值。