大别班达病毒Gn和Gc蛋白的原核表达与免疫原性验证及其在SFTS诊断中的应用研究

这篇研究通过构建重组质粒pET15b-Gn/pET15b-Gc，在大肠杆菌中高效表达并纯化大别班达病毒（DBV）囊膜蛋白Gn和Gc，制备的兔多克隆抗体效价分别达1:512,000和1:256,000。研究证实原核表达的Gn/Gc蛋白具有优异免疫原性，与登革病毒等常见虫媒病毒无交叉反应，用于检测DBV IgM抗体的阳性率分别达84.21%和89.47%，为SFTS（严重发热伴血小板减少综合征）的疫苗研发和诊断试剂开发奠定基础。

　　

1 引言

大别班达病毒（DBV）作为新发蜱传病原体，是严重发热伴血小板减少综合征（SFTS）的致病源，病死率高达30%。该病毒通过长角血蜱在野生动物-家畜-人间传播，其基因组M片段编码的囊膜蛋白Gn和Gc是介导病毒入侵的关键靶点。研究表明Gn蛋白受体结合域（RBD）存在保守线性表位，但原核表达系统的免疫原性评价尚未系统开展。

2 材料与方法

采用浙江分离株（KJ597824.1）构建pET15b-Gn/pET15b-Gc重组质粒，在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用间接ELISA和Western blot评估抗体效价，使用19例临床阳性样本验证抗原诊断效能，统计学分析采用单因素ANOVA和McNemar检验。

3 结果

• 蛋白表达：1 mM IPTG诱导下，rGn（35 kDa）和rGc（43 kDa）均以可溶形式表达，产量分别达6.4 mg和6 mg

• 免疫原性：抗rGn-IgG效价1:512,000，抗rGc-IgG效价1:256,000，Western blot证实特异性结合天然病毒

• 诊断效能：rGn/rGc抗原对DBV IgM检测阳性率分别为84.21%和89.47%（Kappa=0.771），与登革病毒、乙脑病毒等无显著交叉反应

4 讨论

该研究首次证实原核表达的Gn/Gc胞外域（rGn 1-300aa，rGc 1-400aa）保留完整免疫原性，突破真核表达系统糖基化修饰不稳定的限制。诊断数据显示rGc灵敏度略高但rGn特异性更优，提示双抗原联用可提升检测准确性。这些发现为开发SFTS亚单位疫苗和胶体金快速检测卡提供了关键抗原候选，未来需扩大样本验证IgG检测效能。