通过STING通路激活靶向肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）增强骨肉瘤化疗效果的研究

这篇研究揭示了STING激动剂CL656通过重编程肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）极化状态增强骨肉瘤化疗敏感性的创新机制。研究发现多柔比星（Doxorubicin）单独治疗无法激活cGAS/STING通路，而6小时短期STING刺激可诱导M1样极化（CD86+）并保留STING蛋白表达，24小时长期刺激则导致STING降解。关键发现显示新辅助STING治疗与化疗联用可协同提升肿瘤细胞死亡率，为骨肉瘤免疫联合治疗提供了精准时序调控策略。

　　

骨肉瘤治疗困境与免疫微环境特征

骨肉瘤（OS）作为儿童和青少年高发的恶性骨肿瘤，其5年生存率在转移病例中骤降至15-20%。肿瘤微环境（TME）中富含免疫抑制性的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），其中M2样表型通过分泌IL-10、TGF-β等因子促进免疫逃逸。生物信息学分析显示，患者活检组织中STING表达显著低于正常组织，而M2标志物CD163的高表达与不良预后显著相关。值得注意的是，两种常用细胞系呈现差异：SaOS-2细胞缺乏STING但表达cGAS，而MG63细胞同时表达两者。

化疗诱导免疫原性细胞死亡的局限性

研究团队通过条件培养基（CDM）实验发现，多柔比星处理后的骨肉瘤细胞无法通过损伤相关分子模式（DAMPs）激活巨噬细胞STING通路。Western blot显示无论M0、M1或M2样巨噬细胞，化疗组均未检测到IRF3磷酸化。特别有趣的是，M2样巨噬细胞在接触化疗后培养基时，IL-10分泌量反而增加，揭示肿瘤细胞即使死亡仍维持免疫抑制特性。

STING激动剂的时序调控艺术

剂量实验确定10 μg mL^-1 CL656为最佳浓度，但持续时间产生截然不同的效果：

1. 1.

   慢性刺激（24小时）导致所有表型巨噬细胞的STING蛋白降解，伴随基因表达下调

2. 2.

   约束刺激（6小时）在保持STING蛋白水平的同时，显著提升IRF3磷酸化和IFN-β分泌

   流式细胞术证实6小时预处理使CD86+细胞比例增加2.3倍，且这种M1样极化与初始巨噬细胞表型无关。在机制层面，RT-qPCR显示短期刺激不会改变STING mRNA水平，而长期刺激会触发负反馈调节。

序贯治疗的辩证效应

双重STING刺激呈现表型依赖性：

• M0样巨噬细胞：IL-6分泌增加3倍，CD86持续高表达

• M1样巨噬细胞：二次刺激未增强效应，维持基线活性

• M2样巨噬细胞：获得部分M1样特征但保留CD163表达

值得注意的是，Western blot显示序贯刺激仍能诱导IRF3磷酸化，但伴随STING转录水平下降，暗示潜在的表观遗传调控。

协同杀伤的细胞类型特异性

在杀伤实验中，约束刺激方案展现出最佳效果：

• •

  SaOS-2细胞：化疗+STING组死亡率达78%，显著高于单用化疗（50%）

• •

  MG63细胞：STING单独处理即产生53%杀伤，反映STING阳性肿瘤对通路激活更敏感

  但序贯刺激在MG63模型中效果减弱，可能与ROS抑制STING活性有关。透射电镜观察到STING激动剂处理的巨噬细胞分泌更多溶酶体颗粒，提示潜在的直接杀伤机制。

临床转化启示

该研究为骨肉瘤联合治疗提供三大指导原则：

1）新辅助时机：STING激活应先于化疗给药

2）剂量控制：避免超过6小时持续刺激导致的免疫耗竭

3）表型监测：治疗前需评估TAMs组成比例

作者特别指出，纳米载体递送系统可能解决STING激动剂的药代动力学难题，这为后续研究指明方向。