大肠杆菌XL10-Gold菌株显著提升pGreenII三元载体稳定性：温度依赖性优化研究

为解决传统二元T-DNA质粒体积过大导致的构建效率低下问题，研究人员针对pGreenII三元载体(pGNK-LeCas9-AtU6psgRNA)在JM109、DH5α和XL10-Gold三种大肠杆菌菌株中的稳定性开展系统研究。发现XL10-Gold菌株在30°C以下培养时可显著维持载体稳定性，为植物基因编辑载体构建提供关键优化方案。

　　

在植物遗传转化领域，传统二元T-DNA质粒虽广泛应用，但其庞大体积严重制约构建效率。为此研发的更小巧的三元T-DNA载体虽提升克隆效率，却在宿主大肠杆菌(Escherichia coli)中易发生构建体重排和染色体重组事件。虽然降低培养温度能改善载体稳定性，却会延长实验周期。

最新研究聚焦pGreenII载体系统构建的复合载体pGNK-LeCas9-AtU6psgRNA，该载体包含番茄密码子优化的Cas9核酸酶(LeCas9)和马铃薯质外体转化酶抑制剂特异的向导RNA(sgRNA)表达盒，均由组成型启动子驱动。通过比较商业菌株JM109、DH5α和XL10-Gold的载体维持能力，发现XL10-Gold菌株能出色保持该大片段载体的完整性，而另两种菌株表现欠佳。温度梯度实验进一步揭示，将培养温度控制在30°C以下是维持pGNK-LeCas9-AtU6psgRNA稳定性的黄金标准。

这项突破性发现为基于pGreenII的三元T-DNA载体系统建立了可靠的菌株-温度双优化方案，特别是证明XL10-Gold菌株的卓越性能，将显著推动植物基因编辑载体的高效构建与应用。