综述：抗体药物偶联物：创新与治疗前沿

这篇综述全面探讨了抗体药物偶联物（ADC）的生物分析方法和药代动力学（PK）建模进展。文章系统梳理了配体结合分析（LBA）、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）及混合LBA-LC-MS/MS平台在解决ADC异质性、灵敏度等挑战中的应用，并强调了生理药代动力学（PBPK）和定量系统药理学（QSP）模型对ADC开发的关键作用。

　　

抗体药物偶联物的生物分析方法与药代动力学进展

引言

抗体药物偶联物（ADCs）通过单克隆抗体的靶向性与细胞毒性小分子的高效性结合，成为肿瘤治疗的重要武器。自2000年首个ADC药物吉妥珠单抗（gemtuzumab ozogamicin）获批以来，已有十余种ADC获FDA批准，覆盖急性髓系白血病（AML）、乳腺癌等多种适应症。然而，ADC的异质性（如药物抗体比率DAR 0-8）和体内解离行为为其生物分析和PK研究带来独特挑战。

配体结合分析（LBA）的革新

传统LBA技术如酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光免疫分析（ECLIA）因其高灵敏度（可达fM级）和低成本被广泛用于ADC总抗体和结合抗体的定量。例如，针对MMAE-ADC的ELISA方法在食蟹猴血清中检测限低至0.3 ng/mL。而Gyrolab?系统通过微流控技术将样本消耗降至0.02-4 μL，显著提升通量。但LBA无法区分DAR亚型，且抗独特型抗体制备耗时，促使LC-MS/MS技术的崛起。

LC-MS/MS技术的多维突破

质谱技术通过三种策略解析ADC结构：

1. 1.

   自上而下（Top-down）：如毛细管尺寸排阻色谱-原生质谱（nMS）直接测定完整ADC，动态范围达5-100 μg/mL，可监测DAR随时间变化；

2. 2.

   中段分析（Middle-down）：部分还原ADC后结合傅里叶变换离子回旋共振（FT-ICR）质谱，定位偶联位点；

3. 3.

   自下而上（Bottom-up）：胰蛋白酶消化后通过高分辨多反应监测（MRM^HR）定量特征肽段，灵敏度达0.026 μg/mL。

混合LBA-LC-MS/MS的协同效应

免疫捕获富集结合质谱定量克服了传统LBA的局限性。例如，针对PYX-201的杂交方法利用互补决定区（CDR）特征肽段实现人血浆中总抗体（TAb）的精准定量，同时检出传统方法遗漏的生物转化产物。

药代动力学建模的进阶

ADC的PK特性受抗体大分子和细胞毒性小分子的双重影响：

• •

  群体PK模型：聚焦结合抗体或结合载荷的临床相关性；

• •

  机制模型：PBPK模拟组织药物分布，预测药物-药物相互作用（DDI），如恩诺单抗 vedotin与MMAE的DDI研究；

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  QSP模型：整合内化实验（如pH敏感荧光标记）和异种移植瘤数据，量化“旁观者效应”对异质性肿瘤的杀伤。

未来方向

双载荷ADC（如CD276靶向ADC同时携带MMAF和免疫调节剂IMQ）和均质化高DAR分子（如德曲妥珠单抗DAR8）正推动技术边界。通过整合高分辨率生物分析与机制建模，ADC开发将更精准地平衡疗效与安全性，为癌症治疗提供新一代“生物导弹”。