可灭菌型自身抗原固定化层析柱平台：广谱清除自身免疫病致病性自身抗体的创新策略

（编辑推荐）本研究创新性地开发了可耐受灭菌处理的自身抗原固定化层析柱平台，通过细菌表达包涵体蛋白经半胱氨酸特异性阳离子化（S-cationized）处理，实现了对Caspr2和MuSK等跨膜蛋白胞外域线性表位的广谱捕获，解决了现有免疫吸附柱（如Trp/Phe柱）特异性不足与Protein A柱灭菌稳定性差的双重难题，为自身抗体（autoantibody）相关疾病治疗提供了兼具高特异性和灭菌兼容性的新型血液净化方案。

　　

Highlight

本研究提出了一种革命性的蛋白配体设计策略，用于构建可灭菌的自身抗体吸附剂。通过使用变性抗原蛋白作为配体，该平台成功抵御了医疗设备标准灭菌方法的考验：包括高压蒸汽灭菌（autoclave）、环氧乙烷灭菌（EOG）和γ射线辐照（gamma irradiation）。

Protein expression, purification, and TAPS modification

我们选择肌肉特异性酪氨酸激酶受体（MuSK-ECD）和人类接触蛋白相关蛋白样蛋白2（Caspr2-DLLE）的胞外域作为变性蛋白抗原配体，通过暴露水溶性线性表位来构建自身抗体捕获系统（图1A）。这些带His标签的蛋白在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式表达，经盐酸胍（Gdn-HCl）溶解和二硫苏糖醇（DTT）还原后，采用TAPS-磺酸盐对半胱氨酸巯基进行保护性修饰。

Results

实验数据显示，经S-阳离子化处理的Caspr2和MuSK固定化层析柱能高效捕获兔抗血清中的特异性抗体。更令人振奋的是，这些层析柱在经历标准灭菌程序后仍保持稳定的抗体结合能力——即使在导致游离抗原蛋白聚合的高压蒸汽灭菌和γ射线辐照条件下（图4），固定化抗原仍能维持功能完整性。

Discussion

这项突破性技术巧妙地规避了传统全长自身抗原制备的瓶颈：既不需要维持天然构象的复杂表达系统，又通过化学修饰实现了灭菌耐受性。该平台特别适用于靶向线性表位的自身抗体清除，为重症肌无力（靶向MuSK）和抗Caspr2抗体相关脑炎等疾病的精准治疗开辟了新途径。