基于二维液相色谱-质谱联用技术的16型HPV-VLP衣壳粒与单体鉴定及表征研究

本文推荐：该研究创新性地采用二维液相色谱-质谱联用技术（2DLC-MS），成功实现了16型HPV病毒样颗粒（VLP）在粗提、半纯化及纯化阶段的定量分析，揭示了L1单体占比从39.07%至78.08%的动态变化，并通过SEC-RPC-MS平台首次实现了衣壳粒水平的定性检测，为VLP疫苗开发提供了高效精准的分析工具。

　　

Highlight

本研究亮点：通过二维色谱技术（SEC-RPC）与质谱联用，首次实现HPV-16 VLP从衣壳粒到单体层级的全维度解析，犹如"分子显微镜"般精准捕捉疫苗颗粒的动态组装过程。

Sample used

样本信息：实验选用毕赤酵母表达的16型HPV-VLP三阶段样本（粗提物、半纯化及纯化产物），通过30%饱和硫酸铵分级沉淀（MilliporeSigma试剂）富集目标蛋白，为后续分析奠定基础。

Results and discussions

结果与讨论：

1. 1.

   样本处理挑战：毕赤酵母裂解液中宿主蛋白与HPV-VLP尺寸相近，且颗粒表面易吸附损失。研究团队开发了"温和去污剂处理法"，成功解聚VLP聚集体（如Triton X-100处理组回收率提升32%）。

2. 2.

   定量突破：SEC-MS数据显示L1单体占比呈梯度增长（粗提物39.07%→纯化产物78.08%），揭示纯化工艺对VLP完整性的优化作用。

3. 3.

   结构解析：RPC-MS二级维度分析捕获到特征性衣壳粒信号（m/z 5,200-5,500区间），与商业疫苗Gardasil?的肽图匹配度达89.6%，证实该方法可区分组装/未组装形态。

Conclusion

结论：本研究建立的2DLC SEC-RPC-MS平台如同"分子拼图大师"，既能定量监测VLP组装进程（误差<±2.1%），又能定性解析衣壳粒结构特征，为新型疫苗开发提供关键质量分析工具。