NEUROD1/ASCL1/POU2F3/YAP1表达特征揭示LCNEC分子亚型及其治疗潜力

本研究针对大细胞神经内分泌癌(LCNEC)分子分型不明确的问题，通过免疫组化分析133例手术切除样本中NEUROD1、ASCL1、POU2F3和YAP1(NAPY)的表达特征，结合pRb、DLL3等标志物检测和空间转录组分析，首次系统鉴定了LCNEC的五个分子亚型，发现NEUROD1high-ASCL1high和ASCL1high亚型具有DLL3高表达特征，为靶向治疗提供了重要依据。

　　

大细胞神经内分泌癌(LCNEC)作为肺癌中罕见的侵袭性亚型，占所有肺癌的1-3%，其诊断和治疗面临重大挑战。尽管与SCLC（小细胞肺癌）同属高级别神经内分泌肿瘤，但LCNEC在分子特征和治疗策略上仍存在诸多未解之谜。近年来SCLC领域取得重要突破，研究者根据关键转录因子ASCL1、NEUROD1、POU2F3和YAP1的表达特征将SCLC分为四个亚型，为精准治疗提供了新思路。然而，这种分子分型是否适用于LCNEC？不同亚型是否存在独特的治疗靶点？这些关键问题亟待解答。

为回答这些问题，Frank W.J. Heijboer等研究者开展了一项全国性队列研究，成果发表在《Laboratory Investigation》。研究团队收集了2003-2012年间荷兰133例经病理确诊的I-III期手术切除LCNEC样本，通过组织芯片构建和多重免疫组化染色，系统分析了NAPY标志物的表达谱，并结合pRb、DLL3、cMYC等关键蛋白的表达特征。研究还运用GeoMX Digital Spatial Profiling技术对部分样本进行空间转录组分析，以探索肿瘤微环境特征。

在研究方法上，研究团队首先通过严格的病理学复核确保诊断准确性，采用组织微阵列技术提高检测效率。免疫组化检测使用H-score量化评分系统，以>10为阳性阈值，>50为优势表达标准。通过无监督聚类和UMAP降维分析揭示分子亚型，并利用靶向空间转录组技术解析肿瘤免疫微环境特征。

研究结果部分：

1. 1.

   LCNEC患者队列特征：经过严格病理复核，最终纳入133例手术切除样本，其中75%存在pRb缺失，66%表达DLL3，70%表达TTF1。

2. 2.

   个体NAPY表达模式：NEUROD1和ASCL1阳性率最高（48%和50%），而POU2F3和YAP1阳性率较低（7%和14%）。优势表达分析显示ASCL1优势型占26%，NEUROD1占18%，YAP1占9%，仅1例为POU2F3优势型。

3. 3.

   NAPY与关键标志物关联：ASCL1阳性样本与pRb缺失显著相关，且91%呈现DLL3高表达；YAP1阳性样本则多保留pRb表达且TTF1阴性。

4. 4.

   无监督聚类鉴定亚型：发现五个表达亚型：NEUROD1^high-ASCL1^high(10%)、ASCL1^high(22%)、POU2F3^high(5%)、YAP1^high(11%)和NAPY^low(51%)。前两个神经内分泌亚型显示高DLL3表达，而POU2F3^high和YAP1^high亚型神经内分泌标志物表达低。

5. 5.

   空间转录组特征：在"免疫耗竭"组肿瘤细胞中鉴定出LY6E、PSMB10等免疫相关基因上调，提示独特的微环境特征。

讨论部分指出，这是首次在LCNEC中系统应用NAPY分类体系的研究。与SCLC相比，LCNEC显示出更高的NEUROD1优势表达率(18% vs 11%)和更低的ASCL1优势率(26% vs 70%)。研究特别强调了两大神经内分泌亚型(NEUROD1^high-ASCL1^high和ASCL1^high)的DLL3高表达特征，为靶向治疗提供了分子基础。值得注意的是，51%病例属于NAPY^low亚型，提示LCNEC分子异质性更高。

该研究的临床意义在于：首先，为LCNEC的分子分型提供了可靠框架，弥补了现有WHO分类的不足；其次，发现DLL3在神经内分泌亚型中的高表达，支持在该人群开展DLL3靶向治疗的临床试验；第三，揭示YAP1^high亚型可能对免疫治疗更敏感，为个体化治疗策略制定提供了依据。研究团队建议未来应重点探索不同亚型的治疗脆弱性，特别是针对DLL3和YAP1表达差异开发精准治疗方案。