基于TaqMan Array Card技术的韩国水鹿人畜共患病病原体高通量分子监测研究

推荐：本研究首次将TaqMan Array Card（TAC）技术应用于野生动物疾病监测，以韩国水鹿（Hydropotes inermis argyropus）为研究对象，筛查了45种人畜共患病原体。研究发现7种病原体，包括首次在全球水鹿中检出的E. muris和首例鹿科动物脾脏组织中的Giardia duodenalis。研究揭示了病原体的区域性和季节性分布特征，为野生动物作为人畜共患病潜在宿主的生态意义提供了关键证据，并验证了TAC技术在野生动物病原体高通量筛查中的高效性。

　　

野生动物作为人畜共患病病原体的天然宿主，其跨地域活动正成为全球公共卫生的新挑战。韩国水鹿（KWD）作为韩国分布最广的野生有蹄类动物，频繁与人类和家畜接触，但对其携带病原体的系统性研究仍存在技术瓶颈。传统PCR方法通量低、成本高，难以满足大规模监测需求。为此，Kyungpook国立大学的研究团队在《One Health》发表了一项开创性研究，首次将临床诊断中使用的TaqMan Array Card（TAC）技术应用于野生动物监测，为建立高效的人畜共患病早期预警系统提供了新范式。

研究团队采用多学科交叉方法：通过韩国国家野生动物疾病控制预防研究所（NIWDC）获取192份水鹿脾脏样本，覆盖12个地理区域和8个月份；利用TAC平台同步检测45种病原体，检测限达10² copies/μL；阳性结果经常规PCR验证后，对16S/23S/18S rRNA基因进行系统发育分析；采用Bonferroni校正处理空间和时间分布数据的多重比较。

3.1 实验验证

标准曲线显示所有靶标在10²-10⁵ copies/μL范围内线性良好（R²>0.90），内控基因稳定表达，证实TAC检测体系的可靠性。

3.2 TAC系统检测结果

在45种病原体中检出7类，包括已知的Anaplasma（92.2%）、Borrelia（35.4%）、Theileria（95.3%），以及新发现的Ehrlichia（68.2%）、Rickettsia（31.8%）、Bartonella（9.9%）和Giardia（3.1%）。

3.3 常规PCR验证

确认7种病原体的流行率：E. canis（0.5%）、E. muris（1.6%）、N. mikurensis（4.2%）、Candidatus R. longicornii（26.0%）、R. raoultii（2.1%）、B. schoenbuchensis（6.8%）和G. duodenalis（1.0%）。空间分析显示C. R. longicornii在Namyangju地区显著聚集（69.2%），B. schoenbuchensis在Jinju地区高发（50%）；时间分布显示春季（4月）总检出率最高（93.3%）。

3.4 分子与系统发育分析

16S rRNA基因测序证实E. muris与啮齿类宿主菌株高度同源（99.1-100%），G. duodenalis assemblage A的脾脏检出提示可能存在肠外感染途径。

这项研究首次证实TAC技术在野生动物监测中的适用性，其高通量特性较传统PCR效率提升45倍。发现E. muris在鹿科动物的跨宿主传播和G. duodenalis的脾脏定植，重新定义了这些病原体的宿主范围。C. R. longicornii的高流行（26%）提示水鹿可能是该新兴立克次体的重要储存宿主。研究建立的"地理-季节-病原体"三维分布模型，为预测人畜共患病传播风险提供了量化工具。这些发现不仅完善了野生动物病原体本底数据库，更通过技术创新推动了One Health框架下的主动监测策略发展。