益气续骨合剂通过激活AKT1-Thr473磷酸化调控骨关节炎软骨代谢稳态的研究

（编辑推荐）本研究揭示传统中药益气续骨合剂(YQXGHJ)通过激活PI3K/AKT信号通路关键靶点AKT1-T473位点磷酸化，显著改善骨关节炎(OA)软骨降解与代谢失衡。结合LC-MS/MS成分分析、网络药理学及分子对接技术，证实YQXGHJ可促进软骨细胞增殖（CCK-8/EdU验证）、抑制凋亡（流式细胞术），并调控COL2A1/MMP13等ECM代谢标志物表达，为中医药治疗OA提供新机制靶点。

　　

Highlight

YQXGHJ缓解DMM手术诱导的大鼠膝关节软骨损伤

通过内侧半月板失稳(DMM)手术建立OA大鼠模型，研究发现益气续骨合剂(YQXGHJ)显著减轻软骨退变和软骨下骨硬化。组织学分析显示治疗组OARSI评分降低，Micro-CT证实骨赘形成减少，表明YQXGHJ具有多靶点关节保护作用。

YQXGHJ调控软骨细胞代谢平衡的分子机制

在IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型中，含YQXGHJ血清通过以下作用展现治疗效果：

1. 1.

   促增殖：CCK-8和EdU检测显示细胞活力提升130%（p<0.01）

2. 2.

   抗凋亡：流式细胞术显示凋亡率降低42%（p<0.001）

3. 3.

   代谢调控：qPCR证实合成标志物COL2A1/SOX9表达上调，降解酶MMP13/IL-6下调

网络药理学锁定AKT1核心靶点

LC-MS/MS鉴定的96种成分中，黄酮类（如木犀草素）和皂苷类成分与AKT1结合能<-5 kcal/mol。KEGG富集分析显示PI3K-AKT通路显著富集（p=3.2×10^-6），分子对接揭示关键成分通过氢键结合AKT1的Thr473磷酸化位点。

PI3K/AKT通路验证实验

Western blot显示YQXGHJ使p-AKT1-T₄₇₃表达增加2.8倍（p<0.01）。使用MK2206抑制AKT磷酸化后，YQXGHJ的保护效应被完全阻断，证实该通路的功能必要性。免疫荧光显示治疗组p-AKT1核转位增强，提示其通过调控下游转录因子发挥作用。

Conclusion

本研究首次阐明YQXGHJ通过"多成分-多靶点"作用模式激活AKT1-T₄₇₃磷酸化，重塑软骨代谢稳态，为中医药治疗OA提供新的科学依据。