头发皮质醇及其他毛发分析物在一年储存期内浓度下降的系统性个体内研究

为解决毛发激素分析中储存时长对数据质量的影响问题，研究人员开展了一项系统性个体内研究，通过LC-MS/MS技术检测皮质醇、皮质酮等9种毛发分析物在0-12个月储存期的浓度变化。结果显示毛发皮质醇(HCC)储存12个月后下降28.0%，且分析物稳定性随储存时间延长显著降低，为毛发内分泌研究提供了关键方法学依据。

　　

毛发激素分析作为心理神经内分泌学(Psychoneuroendocrinology, PNE)研究的重要工具，能够反映人体长期激素水平变化。然而在实际研究中，样本储存时长对分析结果的影响长期缺乏系统性评估。现有指南建议室温避光干燥储存，但关于储存期限的实证证据薄弱，特别是对皮质醇(Hair Cortisol Concentration, HCC)等关键指标在0-12个月关键期的变化规律尚不明确。这种知识空白可能导致研究间数据可比性降低，甚至产生储存时长混杂的假阳性结果。

为解答这一方法学难题，Katharina Huthsteiner团队在《Psychoneuroendocrinology》发表的研究采用了创新性的四波次阶梯式设计。研究招募81名健康受试者，通过后顶叶区采样获取毛发样本，分割为四份分别进行即时分析或3/6/12个月标准化储存。采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术定量检测近端3厘米区段的皮质醇、皮质酮、孕酮等4种类固醇激素，以及AEA、1/2-AG等5种内源性大麻素。

主要技术方法包括：1) 阶梯式采样设计消除批次效应，将不同储存时长的样本分散在8个分析批次；2) 标准化毛发处理流程，包括甲醇清洗、7.5mg精确称重；3) 混合线性模型分析储存时长效应，控制个体差异和批次变异；4) Fisher Z转换评估分析物稳定性变化。

研究结果揭示：

1. 1.

   毛发糖皮质激素变化

   皮质醇和皮质酮均呈现显著时间依赖性下降，12个月储存后分别减少28.0%和23.7%。值得注意的是，皮质醇在6个月时已出现显著降低，且储存时长与即时分析结果的相关系数从3个月时的0.81降至12个月时的0.62，提示稳定性受损。

2. 2.

   其他激素与内源性大麻素

   孕酮(Prog)表现出最快的降解速率，3个月即下降43.9%；内源性大麻素OEA和1/2-AG分别减少33.8%和69.9%。1/2-AG在所有时间点均显示极低稳定性(r<0.30)，质疑其作为生物标志物的可靠性。而DHEA和AEA则未检出显著储存效应。

3. 3.

   个体差异与机制探讨

   虽然观察到显著的个体间斜率差异，但毛发染色、洗涤频率等特征未能稳定预测降解程度。研究者提出两种潜在机制：分子结构降解或毛发角蛋白脱水导致的提取效率改变，后者可能与洗涤步骤中的分析物流失有关。

讨论部分强调，该研究首次通过严格个体内设计证实：

• 常规储存条件无法完全阻止毛发分析物降解，挑战了"毛发激素室温储存稳定"的传统认知

• 建立6个月为毛发分析的关键时间阈值，超过此时限可能引入显著偏差

• 揭示不同分析物的特异性降解模式，孕酮最敏感而DHEA最稳定

• 提出实验室批次效应与储存效应的平衡方案，建议每6个月进行集中分析

这些发现对提升毛发内分泌研究的方法学严谨性具有深远意义。研究者特别呼吁未来论文应强制报告储存参数，并在统计分析中纳入储存时长作为协变量。该研究为制定毛发激素分析的国际标准化协议提供了关键证据，同时提示需要进一步探索真空储存等新型保存技术的保护效果。