远程血液采集与端粒长度测量：样本特性及处理对DNA质量与检测结果的影响研究

这篇研究创新性地建立了远程采集微量全血样本（50μL）用于定量PCR（qPCR）端粒长度（TL）检测的方法体系。通过265例基线样本和178例1年随访样本的系统分析，证实BD Microtainer采集的血液经磁珠法提取可获得高质量DNA（ICC=0.962），运输时间和-80°C储存时长不影响检测精度，但凝血会导致TL估值偏高，而温度暴露则与TL缩短相关。研究为大规模人群研究提供了可靠的远程采样方案。

　　

ABSTRACT

端粒长度（TL）作为反映遗传与环境因素交互作用的衰老和应激标志物，其定量PCR（qPCR）检测法因成本效益高、样本需求量少，成为人群研究的理想选择。然而传统静脉采血存在物流挑战，多种分析前因素可能影响qPCR结果的可靠性。本研究开发了基于BD Microtainer的远程采血方案，系统评估了样本特性及处理流程对DNA质量和TL检测的影响。

Method

参与者使用含EDTA抗凝剂的BD Microtainer居家采集全血，基线（n=265）和1年随访（n=178）样本通过磁珠法提取DNA，检测DNA产量、纯度和完整性。TL通过qPCR测定，计算三次检测的变异系数（CV）评估批间差异，对重复提取样本计算组内相关系数（ICC）评估检测精度。

Results

仅需50μL血液即可获得高精度TL数据（ICC=0.962）。运输时间和额外1年的-80°C储存未显著影响DNA质量，但凝血样本TL估值偏高0.036个单位（p<0.0001），而高温暴露（>79.5°F）与TL缩短显著相关（r=-0.19）。DNA浓度与260/280nm吸光度比值呈正相关（r=0.41），与260/230nm比值负相关（r=-0.42）。

样本收集成功率

82%基线参与者成功返回可用样本，需平均1.3次穿刺尝试。季节因素分析显示，夏季采集样本TL较冬季短5.3%（p=0.012），可能与温度敏感性降解有关。

DNA质量验证

凝胶电泳显示所有样本DNA完整，但凝血样本DNA浓度显著增高（57.3 vs 34.6 ng/μL，p<0.0001），其260/230nm比值降低提示污染物增加。

检测精度分析

三重检测板CV均值0.031±0.019，无显著板间差异。基线与1年样本TL相关性达0.95（p<0.001），证实检测体系的长期稳定性。

温度影响机制

Davis地区最高气温每升高10°F，TL估值降低0.066单位（p=0.002）。冷链中断（冷包融化）样本TL较冷冻样本低8.7%（p=0.008），提示温度敏感的生物分子降解可能发生。

Conclusions

本研究确立了远程微采血管血液作为qPCR TL检测样本的可行性，同时揭示凝血和温度暴露是影响检测准确性的关键因素。建议后续研究控制采样季节、加强冷链监控，并优化抗凝方案以减少凝血发生。该方案为开展大规模人群衰老研究提供了标准化采样框架。