循环外泌体miR-150-5p作为优化脓毒症和脓毒性休克临床管理的生物标志物：一项发现与验证研究

本研究针对脓毒症（sepsis）与脓毒性休克（septic shock）临床鉴别诊断的难题，通过多中心队列分析血浆外泌体（EVs）来源的microRNA（miRNA）表达谱，发现hsa-miR-150-5p在脓毒性休克患者中显著低表达（AUC=0.852），其与SOFA评分负相关，并通过qPCR和外部数据集验证了其诊断价值，为脓毒症分层管理提供了新型分子标志物。

　　

脓毒症和脓毒性休克是重症患者死亡的主要原因，但两者的早期鉴别仍依赖临床评分和常规生物标志物，缺乏高特异性分子工具。更棘手的是，患者群体存在显著的生物学异质性，传统动物模型难以完全模拟人类疾病进程。近年来，外泌体（extracellular vesicles, EVs）因其携带的微小RNA（microRNAs, miRNAs）在细胞间通讯和疾病调控中的关键作用，成为研究热点。然而，EV-miRNAs在脓毒症进展中的动态变化及其临床价值尚不明确。

为解决这一难题，Marta Martín-Fernández团队在《Journal of Infection and Public Health》发表了一项开创性研究。他们设计了三阶段实验：首先通过高通量测序筛选差异表达的EV-miRNAs；随后用qPCR在独立队列验证；最后对比血浆miRNA公共数据集。研究聚焦术后患者这一特殊群体，通过严格匹配的发现队列（100例）和验证队列（66例），结合外部数据交叉验证，确保结果的可靠性。

关键技术包括：1）使用exoRNeasy Midi Kit从500μL血浆分离EVs；2）NovaSeq 6000平台进行小RNA测序（>1000万reads/样本）；3）基于miRDeep2的生物信息学分析；4）SYBR-Green qPCR绝对定量miR-150-5p拷贝数；5）多变量逻辑回归模型评估诊断效能。

3.1 临床特征与EV-miRNAs差异表达

发现队列中，脓毒性休克患者表现出更高的APACHE II（21 vs 11）和SOFA评分（8 vs 3），且28天死亡率显著升高（22.4% vs 4.8%）。PLS-DA分析显示两组EV-miRNAs表达谱明显分离，共鉴定出18个差异miRNAs，其中hsa-miR-150-5p下调最显著（log₂FC=-1.14）。功能分析揭示这些miRNAs靶向MAPK信号通路和Wnt信号通路，与脓毒症免疫失调机制高度相关。

3.2 hsa-miR-150-5p的诊断效能

该miRNA单独区分脓毒症与脓毒症休克的AUC达0.852（灵敏度86.96%，特异性78.72%）。与中性粒细胞联合时AUC提升至0.932。值得注意的是，其表达水平与SOFA评分呈负相关（ρ=-0.274），提示可作为疾病严重程度指标。

3.3 多队列验证

在qPCR验证队列中，hsa-miR-150-5p仍保持良好诊断性能（AUC=0.805）。分析Caserta等发布的血浆miRNA数据集时，同样观察到该miRNA在脓毒性休克中的低表达，证实其在EVs和血浆中具有一致的表达模式。

讨论部分指出，hsa-miR-150-5p的调控网络涉及NF-κB1、CXCR4等关键靶点，可能通过抑制血管通透性因子ANG2维持内皮屏障功能。与既往研究相比，本研究创新点在于：首次系统评估EVs来源miRNAs在术后脓毒症中的价值；采用绝对定量而非相对定量；发现miR-150-5p与乳酸等常规指标联用可显著提升诊断准确性。

该研究的临床意义在于为脓毒症分层提供了可操作的分子工具：低水平hsa-miR-150-5p提示需升级监护等级，而动态监测可能指导治疗响应评估。未来研究需扩大至非手术患者，并探索基于miRNA的靶向治疗策略，如通过纳米载体递送miR-150-5p模拟物调控免疫稳态。