新生儿小鼠高纯度功能性脑微血管内皮细胞与神经元同步分离优化方案

【编辑推荐】本研究创新性地建立从单只新生小鼠同步分离脑微血管内皮细胞（BMECs）和皮层神经元的技术，通过酶消化/牛血清白蛋白密度梯度离心法，实现两种细胞在相同遗传生理背景下的共培养。相比传统多动物分离方案，该方案纯度更高（经TEER和GABA分泌验证）、耗时减少40-60%，为神经血管交互研究提供精准模型。

　　

Highlight

突破性方法：我们开发的酶消化/牛血清白蛋白（BSA）密度梯度技术，首次实现从单只小鼠同步获取神经组织和微血管片段。神经组织通过过滤离心获得原代皮层神经元，微血管片段经胶原酶/分散酶消化和Percoll梯度离心分离BMECs，两种细胞分别培养于聚-L-赖氨酸和纤连蛋白包被的平板。

细胞特性验证

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  BMECs：通过免疫荧光定量纯度，功能评估包括紧密连接表达、跨内皮电阻（TEER）、血管生成能力和分泌功能。

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  神经元：采用形态计量学、神经递质分泌检测及氧糖剥夺（OGD）敏感性分析。

惊艳结果

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  原代BMECs在传代2-3代时粘附能力显著增强，血管生成能力完胜b.End3细胞系。

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  OGD处理后TEER和NO分泌分别暴跌38.1%和26.1%，而神经元在OGD刺激下GABA分泌飙升至对照组的2.01倍，复氧后骤降52.5%。

方法学优势

与传统多动物方案相比，本技术消除个体差异，纯度更高且耗时缩短40-60%，完美保留细胞原始特性（包括BMECs的"蝴蝶状"排列和神经元的复杂树突分支）。

Conclusion

该平台首次实现从单只小鼠同步获取功能性BMECs和神经元，为疾病中的神经血管对话研究提供"基因背景完全匹配"的理想模型。

第二个Conclusion

本方案不仅为多类型原代细胞共提取提供标准流程，更揭示原代BMECs（弱粘附但强血管生成）与神经元（缺氧敏感且神经递质分泌活跃）相较于细胞系的独特优势，为中枢神经系统疾病研究开辟新维度。