冷储与气态臭氧处理中粪肠球菌NRRL B-2354作为李斯特菌替代菌株在苹果上的验证研究

为解决李斯特菌(L. monocytogenes)在冷藏农产品中的安全风险问题，研究人员评估了非致病性替代菌株粪肠球菌(E. faecium) NRRL B-2354在模拟实验室储存(24周)和商业储存(36周)中的表现，包括冷藏空气(RA)、气调(CA)、1-甲基环丙烯(1-MCP)处理及气态臭氧干预。结果表明，该菌株与李斯特菌具有相似的衰减模式(降幅2.5-3.5 log CFU/苹果)，且在CA联合臭氧处理中稳定性更佳，证实其可作为验证冷储工艺的安全替代物。

　　

在新鲜农产品供应链中，单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)因其在冷藏条件下的顽强生存能力成为重大安全隐患。苹果作为直接食用的生鲜农产品，曾多次因李斯特菌污染引发召回事件。然而，直接使用该病原体进行商业存储验证面临生物安全限制，传统替代菌株L. innocua又可能触发FSMA规定的环境监测警报。华盛顿州立大学Mei-Jun Zhu团队在《Journal of Food Protection》发表的研究，创新性地评估了粪肠球菌(Enterococcus faecium) NRRL B-2354作为非李斯特菌属替代物的可行性。

研究采用WA38苹果为模型，通过实验室模拟(4°C/22°C)和3200平方英尺商业存储设施，系统比较了E. faecium与L. monocytogenes/L. innocua在冷藏空气(RA)、气调(CA, 3.1% O₂/0.4% CO₂)、1-MCP预处理及不同臭氧浓度(55.5-78.2 ppb)下的生存动态。关键实验技术包括：1) 三菌株混合接种法(初始负载6.5 log CFU/苹果)；2) 双阶段选择性培养基(TSAYE叠加牛津/肠球菌选择性琼脂)；3) 36周商业级CA存储系统集成PID臭氧控制；4) 土著微生物群落平行监测。

结果部分

替代菌株的适配性验证

在24小时附着期，E. faecium与李斯特菌表现出相似定殖能力(6.6-6.8 log CFU/苹果)。18周常温储存中三者衰减幅度一致(2.5-2.7 log)，4°C冷藏24周时差异仍不显著(2.7-2.8 log)。商业RA/CA存储36周后，E. faecium与L. innocua均减少3.4-3.5 log，证实其在常规冷储中的替代有效性。

臭氧处理的差异化响应

持续24周的低剂量臭氧暴露出现关键分化：前12周三菌株同步衰减3.1-3.2 log，但12-24周期间L. innocua额外减少2.4-2.7 log，显著高于E. faecium的1.1-1.2 log。停止臭氧后12周CA储存中，两者衰减速率重新趋同，最终E. faecium呈现4.7-5.1 log的保守性降幅，较L. innocua的5.8-6.2 log更具安全余量。

土著微生物的指示价值局限

尽管臭氧使好氧菌减少1.2-1.3 log，但土著菌群在储存后期会反弹至初始水平，且与病原体衰减无显著相关性，强调需要特异性替代菌株进行干预验证。

讨论与意义

该研究首次证实E. faecium NRRL B-2354能满足FSMA对非李斯特菌属替代物的双重需求：既规避检测假阳性风险，又在长期冷储中保持与病原体相当的衰减轨迹。其臭氧耐受性虽高于L. innocua，但恰好构建了"最坏情况"验证模型，为24周低剂量臭氧(55-78 ppb)接续CA储存的杀菌方案(>5 log减菌)提供可靠评估工具。这种采用非致病性、非李斯特菌的替代策略，为新鲜农产品供应链的微生物风险控制开辟了新路径，特别适用于需要长期冷藏的苹果等水果的安全验证。