基于QuEChERS-HPLC-MS/MS联用技术的混合野生蘑菇中五种鹅膏肽毒素快速检测方法优化研究

为解决野生蘑菇中毒事件频发且传统检测方法复杂耗时的问题，研究人员通过优化QuEChERS前处理方法结合高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术，建立了混合野生蘑菇中α/β/γ-amanitin等五种鹅膏肽毒素的快速检测体系。该方法在10–500 μg/L范围内线性良好（R2>0.999），回收率达80.1%–120.3%，检测限低至8–13 μg/kg，首次实现混合样本中毒素的精准识别，为食品安全监管和临床中毒诊断提供了高效技术支撑。

　　

野生蘑菇因其独特风味广受喜爱，但误食毒蘑菇导致的中毒事件已成为全球公共卫生挑战。在中国云南等地区，鹅膏菌中毒事件尤为突出，其毒素α-amanitin和β-amanitin化学性质稳定，90%以上的蘑菇中毒死亡案例与之相关。更棘手的是，中毒早期症状易与肠胃炎混淆，患者常因"假愈期"错过最佳治疗时机，导致不可逆的肝肾损伤。传统检测方法如固相萃取（SPE）前处理步骤繁琐，且多针对单一蘑菇物种，难以应对市场上常见的混合蘑菇样本检测需求。

针对这些痛点，JiYan Duan团队在《Measurement: Food》发表研究，创新性地将QuEChERS（快速、简便、廉价、高效、耐用、安全）前处理技术与HPLC-MS/MS联用，开发出混合野生蘑菇中五种鹅膏肽毒素的检测方案。研究团队采集了45份大理地区野生蘑菇样本，通过优化提取溶剂、吸附剂用量和色谱条件，建立了一套完整的分析方法。

关键技术方法包括：1）采用甲醇-水（5:5, V:V）超声提取样本；2）以PSA和C₁₈吸附剂净化去除基质干扰；3）在Endeavorsil C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm, 1.8 μm）上，以5-mmol/L甲酸铵溶液（0.1%甲酸）-乙腈为流动相进行梯度洗脱；4）采用电喷雾正离子模式（ESI+）和多反应监测（MRM）进行质谱分析。

研究结果部分：

3.1 色谱条件优化：比较不同色谱柱和流动相组合后，确定5-mmol/L甲酸铵（0.1%甲酸）-乙腈体系能实现最佳分离效果，五种毒素在4分钟内完全分离。

3.2 质谱条件：优化获得各毒素特征离子对，如α-amanitin的m/z 919.4→901.4定量离子对。

3.3 样品前处理：甲醇-水提取效率显著优于乙腈（回收率80.1%–101% vs 30%–50%），20 mg PSA+C₁₈组合净化效果最佳。

3.4 方法学验证：线性范围10–500 μg/L（R²>0.999），LOD和LOQ分别为8–13 μg/kg和26–42 μg/kg。

3.5 实际样本检测：45份样本中检出5份含毒（11.11%），且在毒菇与阴性样本5:5混合比例下仍能准确检出。

结论与讨论指出，该方法突破性地解决了混合蘑菇样本中毒素检测难题，较文献报道的单一物种检测方法更具实际应用价值。通过减少吸附剂用量（PSA+C₁₈各20 mg）和缩短分析时间（<4分钟），显著提升了检测效率。研究局限性在于未覆盖其他类型蘑菇毒素，未来需扩展检测范围。该成果为野生蘑菇市场监管提供了灵敏、可靠的技术手段，对预防中毒事件和指导临床治疗具有重要意义。