基于16S rRNA测序与实时定量PCR技术的唾液与阴道分泌物特异性微生物标志物鉴定研究

本研究通过Illumina HiSeq平台对唾液（SA）、阴道分泌物（VA）、精液（SE）及皮肤（SK）样本进行16S rRNA基因测序，结合实时定量PCR（qPCR）验证，首次筛选出8种可区分SA与VA的特异性微生物标志物，为法医体液鉴定提供了新策略。

　　

Highlight

本研究通过整合16S rRNA高通量测序与实时定量PCR（qPCR）技术，系统分析了唾液（SA）、阴道分泌物（VA）、精液（SE）及皮肤（SK）样本的微生物群落特征，成功筛选出8种可精准区分SA与VA的细菌标志物，为法医体液溯源提供了突破性解决方案。

Samples collection

样本采集经中国法医科学研究院生物医学伦理委员会批准（批号2023-024），共纳入140例健康汉族志愿者（18-45岁）的SA、VA、SE和SK样本各35例。所有参与者均签署知情同意书，采样流程严格标准化（详见图S1）。

Results and discussion

测序共获得8,211,062条有效标签，平均读长427.27 bp，标签有效率达70.08%-94.20%。门水平上各体液菌群组成相似但丰度差异显著，属水平则呈现特异性优势菌种。主坐标分析（PCoA）和聚类分析证实样本间微生物群落结构存在显著分离，线性判别分析（LEfSe）进一步鉴定出四类体液的特异性菌群变异模式。

Conclusion

通过qPCR验证的8种微生物标志物（如乳酸杆菌Lactobacillus等）展现出优异的SA/VA区分效能，该成果不仅深化了对体液微生物组的认知，更为法医实践提供了可靠的技术支撑。