嗜冷菌Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida EDT1新型低温蛋白酶的生物技术应用研究

来自土耳其埃尔祖鲁姆的研究人员从寒冷水域分离出10株嗜冷菌，发现Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida EDT1（GenBank PP068881）具有最强蛋白酶活性。通过三相分配法（TPP）获得纯化244倍、分子量39.44 kDa的低温蛋白酶，该酶在5°C/pH 9.0条件下活性最佳，Mg2+可提升活性253%，对商业洗涤剂兼容且能高效清除血渍和草渍，为低温生物催化提供新工具。

　　

这项突破性研究从土耳其埃尔祖鲁姆S??ütlü村的冷水环境中成功分离出10株嗜冷细菌，其中Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida EDT1（基因库登录号PP068881）展现出惊人的蛋白酶生产能力。科研团队采用创新的三相分配法（three-phase partitioning, TPP）在pH 9.0条件下，以1.5倍叔丁醇和80%饱和硫酸铵一步纯化，获得纯度提升42倍、得率高达244%的低温蛋白酶。

电泳分析(SDS-PAGE)揭示该酶分子量为39.44 kDa，在5°C的冰点温度和pH 9.0的碱性环境下展现最佳活性。有趣的是，金属离子能显著激活酶活——1 mM镁离子(Mg²⁺)使活性飙升253%，而苯甲基磺酰氟(PMSF)抑制剂则将其压制至15%。更令人惊喜的是，50%丙酮环境下酶活暴增393%，十二烷基硫酸钠(SDS)更引发336%的活性井喷。

酶动力学检测显示其对酪蛋白的米氏常数(K_m)为0.751 mg/mL，最大反应速度(V_max)达43.29 μmol/mL/min。实际应用中，该蛋白酶不仅能耐受多种商业洗涤剂，还在1小时内高效清除顽固的血渍和植物污渍，展现其在低温洗涤和环保生物催化领域的巨大潜力。