Sweroside通过靶向MAP4K4/NF-κB通路抑制炎症并缓解小鼠内皮损伤与动脉粥样硬化

这篇研究揭示了天然化合物Sweroside通过抑制MAP4K4/NF-κB信号通路，显著减轻小鼠动脉粥样硬化（AS）病变。实验证实其能降低血管炎症（TNF-α/IL-6）、减少内皮细胞（EC）凋亡（Cleaved Caspase-3↓/bcl-2↑）和单核细胞黏附（ICAM-1/VCAM-1↓），并改善斑块稳定性（CD68+巨噬细胞浸润减少）。该研究为AS治疗提供了新型靶向策略。

　　

1 引言

动脉粥样硬化（AS）作为慢性炎症性疾病，其核心机制涉及核因子κB（NF-κB）通路的异常激活。近年研究发现，丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶4（MAP4K4）是NF-κB的上游调控因子，在AS发展中起关键作用。Sweroside作为一种具有抗炎活性的环烯醚萜类化合物，此前已被证实对非酒精性脂肪肝等炎症性疾病具有疗效，但其对AS的作用机制尚未明确。本研究通过构建载脂蛋白E敲除（AKO）小鼠模型，结合体外小鼠主动脉内皮细胞（MAECs）实验，首次揭示Sweroside通过MAP4K4/NF-κB轴改善AS的分子机制。

2 材料与方法

实验采用120 mg/kg/day的Sweroside灌胃处理AKO小鼠12周，以棕榈酸（PA, 0.4 mM）诱导MAECs损伤模型。通过慢病毒载体构建内皮特异性MAP4K4敲低（KD）小鼠，采用免疫荧光（Cleaved Caspase-3/CD31双染）、Transwell迁移实验、染色质免疫沉淀（ChIP）等技术，系统评估Sweroside对内皮功能、斑块组成及信号通路的影响。

3 结果

3.1 Sweroside改善AS病理特征

在WD喂养的AKO小鼠中，Sweroside使主动脉斑块面积减少42%（Oil Red O染色），同时降低斑块内巨噬细胞标志物CD68表达（p<0.01）。透射电镜显示内皮细胞凋亡率下降65%，紧密连接结构明显修复。

3.2 抑制白细胞归巢

通过GFP标记的腹膜渗出细胞示踪实验发现，Sweroside处理组主动脉斑块中GFP⁺细胞数量减少至对照组的35%，伴随VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达下调2.3倍（p<0.01）。

3.3 体外保护内皮功能

在PA诱导的MAECs中，1 μg/mL Sweroside预处理使细胞凋亡率从28%降至9%（Annexin V-FITC/PI流式检测），同时内皮通透性（FITC-葡聚糖渗出量）降低57%。ROS荧光检测显示氧化应激水平下降72%。

3.4 靶向MAP4K4/NF-κB通路

Western blot证实Sweroside特异性抑制p-MAP4K4（Thr187）磷酸化（↓60%），而对p-JNK/p-ERK无影响。ChIP实验显示，Sweroside使p65与VCAM-1启动子的结合活性降低4.1倍。值得注意的是，PKCθ抑制剂可模拟Sweroside对p-MAP4K4的抑制作用，提示PKCθ可能是其上游调控节点。

4 讨论

本研究首次阐明Sweroside通过"PKCθ-MAP4K4-IκBα/NF-κB"级联反应改善AS的分子机制。相较于传统抗炎药，该天然化合物具有多重优势：①特异性调节内皮MAP4K4而不影响其他MAPK家族成员；②同时改善糖脂代谢（血清LDL-C↓31%，胰岛素敏感性提高）；③通过减少巨噬细胞浸润促进斑块稳定。

5 结论

Sweroside作为靶向MAP4K4/NF-κB通路的天然抑制剂，为AS治疗提供了兼具抗炎和代谢调节功能的新型候选药物。未来需进一步优化其给药方案并验证临床转化潜力。