荧光增强型MALDI成像技术中基质升华与喷涂沉积方法的系统性比较研究

这篇研究通过整合载玻片扫描荧光显微镜(SSFM)和基质辅助激光解吸电离(MALDI)成像技术，建立了FluoMALDI多模态成像流程。团队系统比较了升华与喷涂两种基质沉积方法对组织自发荧光增强效果的影响，发现去甲哈尔满(nH)基质能产生最稳定的荧光增强效应，且升华法在磷脂检测效率上更具优势。该研究为根据研究目标选择最佳基质沉积方法提供了重要依据。

　　

亮点

这项研究在FluoMALDI成像流程中创新性地结合了载玻片扫描荧光显微镜(SSFM)和基质辅助激光解吸/电离(MALDI)成像技术，实现了对组织自发荧光结构的精确定位。

材料与方法

所有溶剂和三氟乙酸(TFA)均购自Sigma-Aldrich。实验使用了6种常见MALDI基质：去甲哈尔满(nH)、9-氨基吖啶(9AA)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)、2,5-二羟基苯乙酮(DHAP)、2,5-二羟基苯甲酸(DHB)及芥子酸(SA)。

基质特异性荧光增强谱

如图1所示FluoMALDI多模态成像流程，我们通过升华和喷涂两种方法在小鼠脑、肾和肝组织切片上应用6种基质。研究发现nH基质能产生最强的组织自发荧光增强：喷涂法在绿色通道效果最佳，而升华法在红色和远红色通道表现更优。值得注意的是，基质晶体尺寸对所有测试基质的荧光增强效果均无显著影响。

MALDI-1与MALDI-2成像模式比较

在脑、肝和肾组织切片上比较了两种电离模式对脂质检测效率和空间分布的影响。虽然磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰胆碱(PC)的空间分布在两种电离模式和沉积方法中保持一致，但脂质检测效率受基质类型、晶体尺寸、组织类型和电离模式的综合影响。无溶剂条件下产生细微晶体的升华法，在MALDI-1和MALDI-2成像中对PE(36:2)和PC(36:2)等磷脂的检测效率普遍高于喷涂法。

结论

将SSFM与MALDI成像整合的FluoMALDI流程能实现高空间精度的自发荧光组织定位。研究表明基质类型、组织类型、沉积方法和荧光通道共同影响组织自发荧光增强效果。升华法因其更高的磷脂检测效率，特别适合脂质组学研究。这些发现为根据特定研究目标选择最佳基质沉积方法提供了重要指导。