寨卡病毒通过损害小梁网自噬流促进眼部感染及病理损伤的机制研究

这篇研究揭示了寨卡病毒（ZIKV）通过激活小梁网（TM）细胞自噬活动但阻断自噬流（autophagic flux）的独特机制，证明病毒利用晚期内体/溶酶体（Rab7+/LAMP1+）作为复制枢纽，而自噬抑制剂羟氯喹（HCQ）和巴弗洛霉素A1（Baf-A1）能通过阻断自噬体-溶酶体融合阶段显著抑制病毒复制及眼部病理损伤。研究首次阐明ZIKV通过调控HOPS复合体（VPS39）和SNARE复合体（STX17）蛋白干扰自噬成熟的关键通路，为治疗ZIKV相关青光眼等眼部并发症提供了新靶点。

　　

寨卡病毒在小梁网中的感染机制与自噬调控

ZIKV高效感染小梁网并引发免疫失调

寨卡病毒（ZIKV）亚洲株PRVABC59能在原代人小梁网细胞（HTMC）中高效复制，48小时达到病毒峰值。感染触发模式识别受体（RIG-I/MDA5）和干扰素刺激基因（ISG15/OAS2/MX1）的早期抗病毒反应，但后期转为促炎因子（IL-6/TNF-α/IFNγ）的爆发式释放，显示免疫调控失衡。透射电镜（TEM）直接观察到病毒颗粒定位于自噬小体，而免疫共染色证实其复制中间体dsRNA与晚期内体标志物Rab7和溶酶体标志物LAMP1共定位，揭示病毒对自噬区室的劫持。

自噬流的双重调控：激活与阻断

ZIKV感染显著增加脂化LC3B-II水平并降解SQSTM1/p62，提示自噬激活。然而，通过腺病毒载体Ad5-mRFP-GFP-LC3的荧光示踪发现，感染细胞中黄色荧光（RFP⁺GFP⁺）的自噬小体堆积而红色荧光（RFP⁺）的自噬溶酶体减少，证实自噬流受阻。机制上，病毒上调HOPS复合体关键组分VPS39和SNARE蛋白STX17的表达，但阻断二者介导的自噬体-溶酶体融合，导致未成熟自噬小体成为病毒复制“避风港”。

阶段特异性自噬干预决定病毒命运

药理实验显示，自噬诱导剂雷帕霉素（Rapa）使ZIKV复制量增加2.3倍，而晚期抑制剂Baf-A1和HCQ分别使病毒滴度下降85%和78%。值得注意的是，早期抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）仅产生有限抑制，说明ZIKV更依赖晚期自噬阶段。在IFNAR1^-/-小鼠模型中，HCQ治疗使视网膜病变面积减少64%，而Rapa组病变扩大1.8倍，印证自噬成熟阻断的治疗潜力。

转录组重塑揭示多通路协同作用

RNA测序分析发现ZIKV感染导致2,023个基因差异表达，涉及抗原呈递（HLA家族）、细胞死亡（CASP1/GSDMD）和脂代谢通路。HCQ处理逆转了83%的ZIKV相关转录变化，尤其抑制TLR信号和干扰素通路，同时上调CD74等免疫调节分子。这种“转录重编程”效应为HCQ的广谱抗病毒作用提供了分子基础。

转化医学价值与展望

该研究首次阐明ZIKV通过“劫持自噬流-利用溶酶体”的双重策略在眼组织中的存活机制，突破性地将自噬成熟阶段确立为治疗靶点。基于HCQ（已获FDA批准）的疗法可直接转化应用于临床，而针对VPS39-STX17互作的小分子筛选可能开发出更精准的抗ZIKV药物。这些发现不仅为先天性寨卡综合征（CZS）相关青光眼提供治疗新思路，也为其他以自噬为“帮凶”的病毒性眼病（如单纯疱疹病毒性角膜炎）研究奠定理论基础。