实验性感染鬃狮蜥中Nannizziopsis guarroi的多模态诊断方法评估及其临床意义

这篇研究通过实验性感染模型系统评估了qPCR（定量聚合酶链反应）、NGS（新一代测序）和真菌培养对鬃狮蜥（Pogona vitticeps）Nannizziopsis guarroi感染的早期诊断价值，证实分子检测技术可早于皮肤病变出现前28天（中位数）检出病原体，为临床筛查和精准干预提供了重要依据。研究首次报道雄性个体的股孔感染新表型，并揭示了紫外线荧光检测的局限性。

　　

引言

Nannizziopsis guarroi引发的真菌性皮炎（俗称"黄真菌病"）是鬃狮蜥的重要病原体。尽管现有多种真菌检测技术，但其临床性能尚未明确。本研究通过实验感染模型，首次系统评估了真菌培养、定量PCR（qPCR）、商业化新一代测序（NGS）和紫外线荧光（Wood's lamp）在疾病全程中的诊断效能。

材料与方法

6只成年鬃狮蜥（4雄2雌）通过背中线接种N. guarroi分生孢子悬液（初始剂量7.09×10⁴ conidia/μL），后续三次加强接种（最高达1.12×10⁵ conidia/μL）。每周采集皮肤拭子进行四种检测：真菌培养使用含抗生素的PDA培养基；qPCR靶向延伸因子1基因（NGEF1_234）；NGS通过ITS-2靶标扩增；Wood's lamp评估荧光特性。152天后实施安乐死并进行尸检验证。

结果

所有个体在78-120天（中位数99天）出现皮肤病变，但均不在接种部位。雄性首次病变均为股孔感染（图2A），呈现肿胀、渗出和结痂（图3A），雌性则表现为躯干黄/黑色斑块（图3B,C）。诊断技术比较显示：

1. 1.

   真菌培养最早检出（中位数早于病变28天），但8.7%样本存在污染

2. 2.

   NGS中位数早17.5天检出，1例出现112天超早期阳性

3. 3.

   qPCR中位数早6天，拷贝数/ng DNA范围0.04-15

4. 4.

   所有病变均无紫外线荧光特性

尸检显示15/16个病变经组织学确认含真菌结构（图4A-F），1例出现肺部肉芽肿（图4G,H）。深部肉芽肿中87.5%检出菌丝。诊断一致性分析显示培养与qPCR符合率93.8%，而细胞学与组织学一致性仅53.3%。

讨论

与既往幼体感染研究相比，成年个体需更高接种剂量和更长时间才发病，提示年龄相关免疫差异。股孔感染的新发现警示临床需重视雄性蜥蜴该部位的"堵塞"可能是真菌感染征兆。分子检测的早期优势（尤其NGS）为潜伏期筛查提供可能，而Wood's lamp的阴性结果否定了其筛查价值。1例肺部感染案例强调系统性扩散风险，需考虑影像学评估。

研究局限性包括样本量小和暴露事件累积效应。未来需建立自然感染诊断标准，并探索最低致病剂量。多模态诊断策略的建立将有助于临床早期识别和管理这一重要爬行动物病原体感染。