利用共聚焦显微技术解析AAV亲和层析柱污染中树脂介质、进料组分与工艺条件的交互作用机制

本研究针对腺相关病毒(AAV)纯化过程中亲和层析柱污染机制不明确的问题，通过共聚焦显微技术系统分析了商业化层析介质(POROS CaptureSelect与AVIPure AAV9)在不同进料组分和循环使用条件下的污染物分布规律。研究发现PSDVB基质的PCS介质虽具有优异初始载量，但存在AAV残留与孔道堵塞风险；而琼脂糖基质的AVIPure则表现出更好的洗脱效率和抗污染特性。该工作为优化AAV纯化工艺提供了关键理论依据。

　　

通过共聚焦显微镜(confocal microscopy)对腺相关病毒(AAV)亲和层析过程中的树脂负载与污染行为进行原位观测，系统比较了基于聚苯乙烯二乙烯基苯(PSDVB)的POROS CaptureSelect (PCS)介质与琼脂糖基AVIPure AAV9介质的性能差异。高分辨率X射线CT扫描显示，PCS介质的大孔结构赋予其优异的AAV初始传输能力，但这种深度渗透仅存在于首次使用纯净样品时。当处理澄清裂解液或重复使用树脂时，AAV与残留杂质在树脂近表面区域的沉积会导致孔道堵塞(pore occlusion)，显著影响后续循环中的溶质传输。有趣的是，AVIPure介质表现出更彻底的AAV洗脱特性，在清洗验证(CIP)过程中几乎无残留。本研究深刻揭示了树脂特性、进料组成与工艺条件对AAV亲和层析柱使用寿命和污染行为的协同影响机制。