甜菜碱辅助多重重组酶聚合酶扩增（RPA）结合侧向层析技术实现人类呼吸道病毒变体的同步检测与分型

本研究开发了一种创新的甜菜碱辅助多重重组酶聚合酶扩样（RPA）结合侧向层析检测（LFA）平台，有效解决了传统RPA非特异性扩增问题。该方法可在等温条件下快速（<30分钟）、高特异性（100%符合RT-qPCR）地同步检测SARS-CoV-2变异株，检测限达1 fM，适用于现场快速筛查，为传染病防控提供了突破性技术方案。

　　

¹Highlight

本研究开发了无需探针的甜菜碱辅助多重RPA结合侧向层析检测（LFA）技术，用于SARS-CoV-2变异株检测。通过优化反应体系，发现每反应添加8 μL甜菜碱可彻底消除多重RPA中的非特异性扩增现象。

²Proof of Concept

我们首先评估了针对SARS-CoV-2参考株（生物素修饰正向引物/FITC修饰反向引物）和Delta变异株（FITC修饰正向引物/地高辛修饰反向引物）的特异性。单重RPA验证显示各引物组仅与对应靶标发生反应。在建立多重体系时，通过引入甜菜碱成功抑制了引物二聚体形成和交叉反应，使变异株分型检测可在单管反应中完成。

³CONCLUSION

RPA-LFA平台具备快速、简便、经济的优势。本研究开发的甜菜碱辅助多重RPA-LF平台实现了SARS-CoV-2变异株的同步检测与分型。该技术对变异株显示高度特异性，检测灵敏度达1 fM（肉眼可视），临床样本验证与RT-qPCR结果完全一致（120例样本包括阴性、Alpha和Delta变异株）。此技术平台可拓展至其他病原体检测，特别适用于暴发疫情中新兴变异株的快速筛查。