PPARγ激动剂通过上调NECTIN4增强CAR-T细胞治疗膀胱癌疗效的机制研究

膀胱癌治疗面临EV（enfortumab vedotin）耐药和NECTIN4表达异质性等挑战。研究人员开发了靶向NECTIN4的CAR-T细胞，发现PPARγ通路调控NECTIN4表达，激动剂罗格列酮可显著增强CAR-T疗效，并在EV耐药模型中保持活性。该研究为膀胱癌免疫治疗提供了新策略，发表于《Nature Communications》。

　　

膀胱癌作为第二大泌尿生殖系统恶性肿瘤，每年导致超1.6万人死亡，其中转移性膀胱癌（mUC）患者5年生存率仅约5%。虽然靶向NECTIN4的抗体偶联药物enfortumab vedotin（EV）已获批临床，但长期缓解率低且耐药问题突出。NECTIN4作为免疫球蛋白样跨膜蛋白，在膀胱癌中呈现高度异质性表达，尤其在管腔亚型中富集。这一特性使得开发新型靶向策略成为迫切需求。

研究人员通过构建靶向NECTIN4的第二代CAR-T细胞（含CD28共刺激域），发现其杀伤效果与NECTIN4表达水平呈正相关。进一步揭示PPARγ（过氧化物酶体增殖物激活受体γ）作为关键转录调控因子，通过结合NECTIN4启动子区直接调控其表达。糖尿病治疗药物罗格列酮（rosiglitazone）作为PPARγ激动剂，可显著上调膀胱癌细胞表面NECTIN4水平，使低表达肿瘤对CAR-T敏感性提升3倍。在EV耐药模型中，尽管肿瘤细胞对EV产生10倍IC₅₀耐药性，但仍保留NECTIN4表达并对CAR-T保持敏感。临床活检分析显示，26%患者存在NECTIN4基因扩增，且多数EV耐药患者（9/17）活检显示NECTIN4表达升高。

关键技术包括：1）构建含IgG4-Fc（EQ）间隔区的CD28-CAR载体；2）建立CRISPR/Cas9基因敲除和过表达模型；3）采用IncCyte实时监测杀伤效果；4）NSG小鼠异种移植模型验证；5）临床样本队列分析（含17例配对活检）。

研究结果显示：

1. 1.

   CAR-T开发与验证：六种不同scFv构建的CAR-T中，NECTIN4-CAR1对RT112细胞展现剂量依赖性杀伤（E:T=1:2时杀伤指数达0.85），且特异性通过KO实验验证。

2. 2.

   表达依赖性：在UMUC-1（管腔型）和647V（基底型）细胞中，杀伤效率与NECTIN4膜表达量显著相关（r=0.96, P=0.0097）。

3. 3.

   PPARγ调控机制：

   • •

     激动剂处理72小时使NECTIN4 mRNA提升4倍

   • •

     ChIP-qPCR证实PPARγ结合NECTIN4启动子（富集倍数>3）

   • •

     抑制剂T0070907可逆转该效应

4. 4.

   体内协同效应：罗格列酮预处理（20mg/kg×5天）使小鼠肿瘤NECTIN4蛋白增加2.1倍，联合CAR-T治疗使RT112模型生存期延长50%。

5. 5.

   克服耐药性：EV耐药细胞系（IC₅₀=25.1μg/mL）对enfortumab-derived CAR-T2仍敏感（杀伤指数差异<15%）。

结论指出，PPARγ-NECTIN4轴是膀胱癌管腔分化的关键调控通路，短期PPARγ激动剂预处理可扩大CAR-T治疗窗口而不增加皮肤/膀胱上皮细胞的on-target毒性。该研究不仅为EV耐药患者提供了替代方案，更开创了"肿瘤抗原 priming"的联合治疗新范式。

值得注意的是，约40%非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）对BCG治疗无效，而NECTIN4在该群体中高表达，提示局部CAR-T灌注的潜在应用价值。未来需在免疫健全模型中验证该策略，并探索与PD-1抑制剂的协同效应。这项由Kevin Chang等完成的研究，为实体瘤CAR-T治疗中抗原异质性难题提供了创新解决方案。