基于微芯片电泳与双核酸循环扩增技术高灵敏检测枯草芽孢杆菌及其应用研究

本研究针对乳制品中枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）污染问题，开发了一种结合微芯片电泳（MCE）与双核酸循环扩增（APE1介导循环+CHA）的高灵敏度检测方法。通过特异性探针捕获16S rRNA并经酶促反应与信号放大，实现29 CFU/mL的检测限，成功应用于巴氏奶样品检测，为食品微生物安全监测提供了快速、高特异性的技术方案。

　　

在乳制品领域，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis, B. subtilis）被视为一种有害的腐败菌。为应对其检测需求，本研究首次通过微芯片电泳（Microchip Electrophoresis, MCE）结合双核酸循环扩增策略——包括无嘌呤/无嘧啶位点内切酶1（APE1）介导的循环反应与催化发夹组装（Catalytic Hairpin Assembly, CHA），实现了对B. subtilis 16S rRNA的高灵敏度定量。在APE1介导的循环中，两个设计含AP位点的探针捕获目标RNA，APE1酶切AP位点并释放可循环利用的RNA；其产物进一步触发CHA反应，生成用于MCE检测的终产物。在最优条件下，该方法对B. subtilis的检测限低至29 CFU/mL（信噪比S/N=3），并在巴氏杀菌牛奶样品中展现出高速、高灵敏度和良好特异性。