从批次到连续多柱层析：利用连续亲和捕获技术优化AAV8纯化工艺，提升基因治疗载体生产效率

本综述系统探讨了利用Resolute? BioSMB PD平台，将AAV8（腺相关病毒血清型8）的亲和层析纯化从传统批次操作升级为连续多柱层析（MCC）的策略。研究比较了批次多柱层析（B-MCC）与连续顺序多柱层析（S-MCC）两种模式，证实S-MCC在回收率（76%）、生产率（1.8×1017 VP·hr-1·mL-1）及缓冲液消耗减半等方面显著优于B-MCC，为生物制药行业连续化生产高需求生物制品（如AAV）提供了关键技术支持。

　　

AAV生产

人胚胎肾细胞293T（HEK 293T）在悬浮培养中通过BalanCD HEK293培养基（添加4 mM GlutaMAX）于8% CO₂、37°C条件下扩增，用于生产10 L规模的AAV8原料。

穿透曲线

通过不同流速（1.5 CV/min和2.5 CV/min）加载AAV8澄清样品，分析流穿份中的病毒衣壳滴度。较高流速导致更早的样品穿透（图2）。采用Thomas模型拟合穿透曲线，为多柱工艺设计提供参数依据。

结论

本研究基于Resolute? BioSMB PD平台开发了两种AAV8亲和捕获多柱操作模式（B-MCC和S-MCC）。B-MCC实现了连续加载，通过控制树脂结合容量减少产物损失，衣壳回收率达60%，平均生产率为1.24×10¹⁷ VP·hr^-1·L^-1。S-MCC模式表现出更优的性能。